相对完善的细胞制剂生产和质量控制平台2023-05-17 08:57:15
本研究对2批标示灵敏度为0.125 EU/mL的鲎试剂进行灵敏度复核，测定其灵敏度为0.125EU/mL，提示该批鲎试剂可用于后续试验。干扰预试验是初步明确供试品与鲎试剂的相容性，结果提示供试品1、2、4倍稀释对鲎试剂均无干扰作用；但通常不选择第1个出现阳性结果的供试品浓度作干扰验证试验，笔者选择2倍稀释供试品进行后续试验。干扰验证试验的结果明确2倍稀释供试品对鲎试剂无干扰作用，选择其为日常供试品细菌内毒素检测的稀释倍数。由于干扰初筛试验和干扰试验的供试品溶液应为未检验出内毒素的溶液，笔者将新鲜配制的完全培养液进行72h 培养验证无菌后用于干扰初筛试验和干扰试验，其结果与人脐带间充质干细胞培养上清来源供试品的检测结果的一致，提示试验结果可信可靠。笔者所在单位为国家干细胞临床研究基地，在政策允许时期开展树突状细胞、细胞因子诱导杀伤细胞等免疫细胞的临床应用工作，有相对完善的细胞制剂生产和质量控制平台。本试验的供试品来自人脐带间充质干细胞原代培养至培养到第13代的培养上清，笔者整理了4批供试品的检测结果。在干扰初筛试验和干扰验证试验中用第1代细胞培养上清为供试品，未用原代组织块贴壁培养上清，原因是人脐带间充质干细胞组织块贴壁培养法的原代培养上清中有脐带组织华氏胶来源的黏多糖等成分使培养液较黏稠；其次，原代培养时间长，根据细胞爬出情况在第9～14 天传代，如果有污染，通过肉眼和/或在倒置显微镜下观察能发现污染；另外，凝胶限量法检测2倍稀释原代细胞培养上清来源供试品内毒素的方法可行；因而，未选用组织块贴壁培养法的原代培养上清进行干扰初筛实验和干扰验证试验。
出自《凝胶法测定脐带间充质干细胞培养上清中细菌内毒素》作者陈耐寒,赵倩,李丽.
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