外泌体提取技术标准化进展2022-07-04 08:48:57
纵观目前已存在的外泌体提取技术,主要是基于体积和密度差异的原理来获取纯度较高的外泌体,这一技术主要体现在临床前基础研究中。外泌体的临床转化势必需要实现从科学实验到商业产品的转化,这一目标的实现主要需从细胞培养、外泌体提取和外泌体纯化三个方面进行思考和研究。搅拌式生物反应器技术、灌注培养技术和中空纤维灌注生物反应器技术可实现外泌体的大批量生产;合适的培养条件如生长因子、氧气浓度或其他刺激物影响的研究可探索出高产外泌体的方法。目前,流场流分离和多角度动态光散射是外泌体商业化生产和纯化常用的方法,可精确地测定粒径分布和颗粒在溶液中的浓度,分离出的微粒可以自动用标准馏分收集器收集。另外,外泌体的临床转化也需其在同种异体环境中具有可重复性、可拓展性、稳定性和良好的临床监控性能。Melo等通过免疫亲和分离技术从胰腺癌患者的血清中提取外泌体,发现外泌体可高表达蛋白多糖和磷脂酰肌醇聚糖1,GPC1阳性可区分胰腺癌患者及正常患者。然而,Lai等学者则通过色谱固相分离技术提取外泌体,发现在胰腺癌患者的循环外泌体中,其中微小RNAmiR⁃10b,miR⁃21、miR⁃30c和miR⁃181a的高表达以及miR⁃let7a的低表达更具有诊断价值。这两份科学研究的不同主要在于外泌体提取方式的差异。因此对于同一疾病统一的外泌体提取纯化标准尤为重要。
为使标准化胞外囊泡提取技术广泛应用于临床研究,2018年11月国际胞外囊泡协会在中国广州发起了以胞外囊泡为基础的临床研讨会。众多专家学者就4个关键主题进行了讨论:①胞外囊泡的标准化分离及提取技术;②胞外囊泡组学分析及生物标记物的探索;③胞外囊泡生物标记物在临床诊断的应用;④胞外囊泡在人类疾病中的治疗。就“胞外囊泡的标准化分离及提取技术”这一专题,学者们讨论了最前沿的外泌体快速分离技术如目前发展较快的芯片技术,另外多种分离技术结合的方式也可精确有效地提取外泌体。目前没有单一的方法可以用于所有样本类型和应用的分析。对于不同样本中外泌体的提取,参会学者们认为需要考虑但不限于以下因素:样品的来源、胞外囊泡的亚群、用于下游的分析;对于外泌体纯度的考量,定量方法的比值可以提高外泌体纯度测定,可作为外泌体的纯度指标。
出自《细胞外泌体的分离提取标准化及临床转化进展》作者叶青松,彭友俭,骆瑜。
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