USCs具体的分离培养方法如下:（1）收集无菌中段尿液,加入抗生素防止污染,离心收集沉淀;（2）磷酸盐缓冲溶液洗涤沉淀两次;（3）沉淀物重悬于USCs培养基;（4）将悬浮液接种到预先明胶包被的24孔板,放入5％ CO2 、37℃培养箱培养。约3~8 d,即有细胞克隆形成。 此外,尿液离体后样本保存时间和方式是至关重要的,与USCs的活性息息相关。 新鲜的尿液样本应储存在4℃条件下,并且在尽量短的时间内分离 USCs。Lang等通过优化尿液离体后的保存技术,发现即使经过24h的储存和运输,依旧可以保持USCs的细胞活力和细胞特性,例如在细胞形态、增殖方式、表面标记物表达、自我更新能力、分化能力、端粒酶活性、染色体稳定性等方面。与传统干细胞的获取方式相比,USCs的分离仅需简单的离心,成本低廉,无需住院、活检和手术等额外支出, 是比较理想的自体干细胞来源。

 

USCs呈短梭“米粒样”外观,生长曲线呈典型“S”形,有足够的端粒酶长度和高端粒酶活性,具有高度的扩增能力、良好的分化能力且无成瘤风险。研究表明,USCs培养大约4周后,单个USC克隆可以获得3.8×108个细胞,200mL尿液样本产生的平均细胞数可达到约5. 0×109个。由此推算,24h的尿液收集即可获得足够数量的细胞,能够满足大多数患者临床应用的需求。USCs经过数代培养后,染色体数目保持稳定,并且在裸鼠皮下移植后,无肿瘤或恶性组织形成。USCs表达关键间充质干细胞标志物,周细胞标志物和多能干细胞标志物,不表达造血干细胞标志物。
 

出自《尿源干细胞及其细胞外囊泡在再生医学中的研究进展》作者徐依赟,邱雨,吴氢凯。