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胎牛血清实施抗原抗体检测所采用的方法2021-10-09 09:25:43

根据病毒基因组5′-UTR 的 序 列 将 BVDV 分成2种基因型,即基因1型和2型。目前国内以BVDV-1流 行 占 优 势 地 位,BVDV-2较 少,而BVDV-2主要流行于一些欧洲国家,根据对BVDV-2型毒株的流行病学 调 查 发 现,BVDV-2型病毒最初发现与经典BVDV株抗原性不同,被称为非典型性瘟病毒,与 经 典 型 BVDV-1感染症状大体相同,大多数牛感染 BVDV-2后表现温和的亚临床症状,主要为腹泻、呼吸道症候群,但BVDV-2可呈持续感染状态。

本研究成功从进口胎牛血清中分离到一株BVDV,通过应用DNAStar对BVDV5′-UTR、NpRo与 GenBank中公布的瘟病毒参考株进行多序列比对,遗 传 进 化 分 析 表 明,该 分 离 株 与 USMARC-60779(BVDV-2)株有较近的亲缘关系,同属于BVDV-2型毒株,将其命名为 BVDV-GC,该毒株的分离对中国 BVDV 流行病学调查以及致病机理等方面研究具有重要意义。胎牛血清作为实验室中科研工作和生物制品制造过程中不可或缺的原材料,其安全性备受关注。

有研究表明,中国不同地理来源的商品牛血清制品都被污染了至少一种瘟病毒,1991年在美国国家动物疾病中心190批市售胎牛血清中分离出93株病毒。张强等抽检了国内广泛使用的进口牛血清,检测结果显示胎牛血清中抗原阳性率较高,且其中存在BVDV抗体;张淑琴等对在商业牛血清中 BVDV 的遗传多种疫苗的动物发生血清转化或疾病。在中国,种类丰富的牛血清已用于生产活疫苗抵抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪瘟病毒(CSFV),但市场上的牛血清还是有部分存在BVDV污染的现象,由于 BVDV 和 CSFV 存 在 抗 原 交 叉 性,因 此 带 有BVDV抗原的血清不能用来培养CSFV,而应用BVDV 污染的猪瘟疫苗免疫猪可能导致其感染BVDV,引起类似于非典型猪瘟的发生。
 
研究表明,由于病毒在血清中可保持高稳定性状态,因此血清是很好的用于检测BVDV的诊断标本,由 于 胎牛血清(FBS)是由许多犊牛血清共同组成的,胎 儿自身所携带的不定BVDV可能导致产品的污染。鉴于部分进口胎牛血清被BVDV污染,因此欧洲立法要求在生产兽药之前对血清进行灭活处理,中国也规定牛血清在使用前,尤其是在用于制造人和动物疫苗等生物制品时,应严格检测其中是否存在BVDV活毒,目前中国只允许从澳大利亚、新西兰和乌拉圭等无疯牛病的国家进口胎牛血清,而国内市场上不明渠道美国产胎牛血清的存在,对中国动物疫病控制带来不确定性因素,因此实验室购买的进口胎牛血清在使用前均需进行BVDV 抗原抗体检测。
 
本试验中对进口胎牛血清实施BVDV抗原抗体检测所采用的方法由于细胞分离培养所需周期长,难以满足口岸快速检测的需要,还有待优化,后期应思考较为简便快捷的检测方法,以保证检测效率及结果的可靠性。此外据有关文献报道,采用一种新型夹心酶联免疫吸附检测试剂盒评估未经处理的胎牛血清中的BVDV,在散罐装牛奶中检测到病毒RNA 和BVDV抗体,但广泛用于包被抗原的脱脂奶粉中是否也存在BVDV抗原和抗体还未被证实,本研究通过酶联免疫吸附法及 BVDVELISA抗体检测试剂盒对脱脂奶粉中所含 抗体进行检测,检测结果为BVDV阳 性,证明脱脂奶粉中确实存在BVDV抗体,排除后续试验可能出现假阳性的可能,减少非特异性反应的发生。
 
出自《胎牛血清中牛病毒性腹泻病毒2型毒株分离及脱脂奶粉中抗体的检测》作者张超,何金科,何延华。