油红O染色评估细胞质内脂质空泡的形成情况2023-08-23 09:04:10
成脂肪诱导是将处于生长旺盛期的骨髓间充质干细胞接种到6孔板中，每孔加入2mL完全培养基并且定时换液，等到细胞融合度达到100％或者过融合时，去除孔内的培养基，并向每孔加入2mL成脂诱导分化培养基A液（1μmol/L 地塞米松、0.5mmol/L 甲基异丁基黄嘌呤、10μg/mL 胰岛素、100mmol/L吲哚美辛和10％胎牛血清）。诱导3d后，吸走6孔板中的A液，加入2mL带10μg/mL胰岛素和10％胎牛血清的成脂诱导分化培养基B液。B液作用24h后，吸走B液，换回A液进行诱导。如此循环3~5次，继续用B液维持培养4~7d直到脂滴变得足够大、足够圆。B液维持培养期间，每隔2~3d需要更换新鲜的B液，21d后，通过油红O染色评估细胞质内脂质空泡的形成情况。在成脂分化过程中，主要参与的转录因子有miR-17、miR-21和miR-143。成软骨诱导分化与上述两种分化的主要差异在于对细胞的悬浮培养。取生长旺盛的细胞置于离心管中，用0.5mL间充质干细胞成软骨诱导完全培养基重悬，室温下150r/min离心5min（拧松离心管管盖以便于气体交换），后将其放置于37℃，5％CO2的培养箱中培养。当细胞团出现聚拢现象时，轻弹离心管底部使软骨球脱离管底，悬浮在液体中。定时更换培养基，诱导21~28d后，对软骨球进行福尔马林固定和石蜡包埋切片，最后进行阿利辛蓝染色。成软骨分化中，性别决定Y染色体区域相关的高迁移率族盒基因 9 以及锌指蛋白145等都是起到关键作用的主要转录因子。
出自《骨髓间充质干细胞的分离、培养、鉴定及其在关节软骨损伤修复中的相关应用》作者刘少斐，许冰冰.
上一篇： 干细胞的自我更新和软骨分化能力
