iPSC来源的造血祖细胞产生成熟的NK细胞2024-08-26 08:46:11
在分化之前，复苏iPSC细胞系，并在人多能诱导干细胞合格的基质凝胶包被的6孔板中在nCT无饲养细胞维持培养基中培养4～5d，达到80％汇合度时准备传代。传代前，制备造血分化培养基，由STEMdiffAPEL2、40ng/mLSCF、20ng/mLBMP4和20ng/mLVEGF组成，前3d补充10mMＲOCK抑制剂。iPSCs传代培养接种在100mL含有抑制剂的培养基中超低吸附、圆底96孔板内，密度为3000个细胞/孔。细胞在220g离心5min，以促进胚状体结构的形成，并在37℃和5％CO2下不受干扰地孵育3d。在第4天、第8天，通过从每个孔中取出70μL培养基并加入100μL新鲜制备的不含抑制剂的造血分化培养基来进行培养基更换。在第12天，收集造血祖细胞用于流式细胞仪分析。造血祖细胞以14EBs/孔的浓度接种在标准细胞培养处理的6孔板中的4mLNK细胞分化培养基中，所述培养基由STEMdiffAPEL2、20ng/mLSCF、20ng/mLIL－7、10ng/mLIL－15和10ng/mLFlt3L组成，其中补充了5ng/mLIL－3。仅在第1周用新鲜制备的含有IL－3的NK细胞分化培养基替换一半的培养基，每周两次，持续4周，在随后的3周中不含IL－3。在4周的NK细胞分化培养后，收集细胞并通过流式细胞仪进行表型分析，或者在细胞毒性和功能性分析之前，在补充有5％hAB血清、1％青霉素/链霉素、0．2mML－谷氨酰胺、10ng/mLrhIL－15、5500IU/mLrhIL－2的ＲPM1培养基中扩增3～4周。
出自《诱导多能干细胞来源自然杀伤细胞的生物学特性》作者:杨碧云，刘涛，毕清华.
