固相核酸和磁珠筛选的提取2021-11-25 09:39:25
固相体系在缓冲液环境下,萃取过程中会特异性吸附核酸DNA。目前可以用于制作固相萃取柱的材料有硅胶基质、玻璃颗粒、硅藻土和阴离子交换载体。固相提纯通常需要使用离心机,通过离心力分离DNA和其他物质,能快速提纯核酸。固相萃取法的4个关键步骤是细胞裂解、核酸吸附、洗涤和洗脱。商品化的固相核酸提取试剂盒品牌有QIAGEN、THERMO、PROMEGA等,可以直接将裂解的样品匀浆液通过固相萃取柱。在缓冲液高pH和高盐条件下,萃取柱上的硅胶膜会特异性吸附核酸。而蛋白质等其他物质也可能与膜表面有很强的特异性结合,通过使用含有竞争剂的缓冲液洗涤硅胶膜,去除蛋白质及其他物质。通过乙醇洗涤后,使用洗脱缓冲液洗脱,获得纯化后的DNA溶液,通常使用离心机快速洗涤和纯化。磁珠筛选法:采用具有独特分离作用的磁珠和独特的缓冲液系统,从动物组织等样品中分离纯化高质量基因组 DNA。使用一些大比表面积的无磁性材料包裹可被磁化的核心材料,大比表面积的材料更适合与核酸结合,如不同的合成聚合物、生物聚合物、多孔玻璃;同时磁性材料作为分离过程的载体。独特包埋的磁珠在一定条件下对核酸具有很强的亲和力,而当条件改变时,磁珠释放吸附的核酸,能够达到快速分离纯化核酸的目的。通常与高通量自动工作站配合使用可以提高DNA产率、纯度和一致性,同时样品之间可以避免交叉污染。整个提取过程从开始到结束大约需要60min,因为只需要3个简单的步骤:(1)将液体样品添加到试剂盒中;(2)将试剂盒放入机器中;(3)按下启动按钮。自动化仪器运行结束后即可获得高质量高浓度的DNA的缓冲盐溶液。
出自《在干细胞药物临床前研究中动物样品基因组DNA高通量提取的固相萃取法和磁珠筛选法初探》作者张臣,谭锦绣,李薇。
上一篇: 肿瘤干细胞是多向分化潜能的细胞
下一篇: 干细胞药物盐霉素具有靶向肿瘤干细胞的作用