问：什么是免疫印迹法？2024-01-02 09:33:59
答：蛋白质免疫印迹是将细胞或组织提取的总蛋白质经电泳分离后，从凝胶转移至固相支持硝酸纤维素膜或聚偏二氟乙烯上形成印迹膜，印迹膜上的目标蛋白可以被特异性抗体识别并捕获，接着利用酶或同位素标记的二抗作为信标，经过底物显色或放射自显影可对被捕获的目标蛋白进行信号示踪。蛋白质易受pH、温度、离子干扰等环境因素影响，发生二级结构折叠，当抗体的识别位点因结构折叠出现隐匿或偏转时，便无法精准识别目标物。而分子印迹是固定相，不会受检测环境干扰，且由于其依靠蛋白质的完整分子进行识别，不会因位点隐匿而造成脱靶。由于分子印迹在目标识别和捕获上的良好稳定性，可被用于不同环境条件下的γH2AX检测。Ahmadzadeh等用免疫印迹法对百里醌联合顺铂处理的人成骨肉瘤细胞中的γH2AX进行测定，并分析了DNA的损伤状况。近几年，细胞内蛋白质技术被开发用以分析和定量γH2AX。ICW是一种免疫细胞化学实验，它无需裂解细胞，再利用荧光来原位定量体外细胞中的蛋白质。与传统蛋白质印迹相比有更高的通量，不同于蛋白质印迹实验步骤的复杂性，ICW操作较为简单且准确度高、重复性好。
综上，虽然以上几种检测细胞和组织内γH2AX的方法趋于成熟，但每种检测方法依然存在不足之处，如操作复杂、检测速度和准确性还有待进一步提高等。因此，建立快速化、准确化、便携自动化、高通量化的γH2AX检测方法是未来的重要研究内容，明确H2AX磷酸化和去磷酸化过程中的分子机制则有助于研发更好的γH2AX检测和共检测方法。
出自《DNA损伤和修复中的H2AX磷酸化及其在生殖相关细胞中的作用》作者陈红,徐沛欣,王惠增.
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