问： 原代神经元怎样分离培养？2024-07-29 09:56:19
答：1d龄SD乳鼠麻醉处死后于体积分数75％乙醇中浸泡5min，无菌操作取出大脑皮质，去除血管脑膜后清洗剪碎，加入含EDTA的0.125％胰蛋白酶消化，立即用管口稍过火钝化的1mL移液器轻柔吹打20下，总用时约20s，加入神经元原代细胞培养基（DMEM/F-12培养基+体积分数10％胎牛血清+1％双抗）终止消化，再次轻柔吹打混匀并用200目滤网过滤，将过滤液移至15mL离心管，1000r/min离心5min，再次使用上述培养液重悬沉淀，将适当量细胞混合液接种于多聚赖氨酸包被的6cm细胞培养皿中，在37℃、体积分数5％CO2培养箱中培养24h，使用含5μmol/L阿糖胞苷的神经元培养液（DMEM/F-12培养基+2％B27+1％谷氨酰胺+1％双抗）进行全量换液，抑制星形胶质细胞的生长，24h后使用神经元培养液进行全量换液，之后每2d半量换液，约4d后细胞可用于后续实验。出自《外胚层间充质干细胞来源细胞外囊泡促进神经元轴突的伸长》作者:孙海涛,任春朋,杨永涛.
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