问：肝星状细胞分离培养怎样做呢？2024-09-09 09:31:51
答：采用胶原酶灌注消化法和密度梯度离心法收集肝星状细胞。取小鼠肝脏组织，肝脏离体后，门静脉插管，Hank’s液灌洗，38℃Ⅰ型胶原酶灌洗消化肝组织，有齿镊分离去除肝包膜，200μm孔径细胞筛过滤，回收细胞悬液 50×g 低速离心3min，回收上清，离心、回收反复循环3次，150×g离心10 min，吸弃上清液，用15％iodixanol溶液 （ρ=1.084 g/mL） 悬浮离心管底部的细胞团，上层缓慢添加8％iodixanol 溶液 （ρ=1.050 g/mL），再在上层缓慢添加5mL Hanks液，1400×g离心15 min，收集位于8％iodixanol和15％iodixanol溶液交界液面处的肝星状细胞，用含体积分数为 10％ 胎牛血清的α-MEM培养基培养，每2d换液1次，待细胞融合度约70％时消化传代处理。显微镜下观察细胞形态，328nm波长紫外光激发细胞自发荧光，细胞免疫荧光染色法检测肝星状细胞中α- 平滑肌肌动蛋白的表达情况。出自《脂肪间充质干细胞来源外泌体调节肝星状细胞自噬的机制》作者:陈振坤，朱世伟，肖竞楠.
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