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犬多能干细胞培养体系的优化与标准化研究2025-08-06 08:35:18

在促进犬诱导多能干细胞重编程过程中应用广泛的蛋白激酶抑制剂包括糖原合成酶激酶-3β抑制剂CHIR99021、丝裂原活化蛋白激酶激酶抑制剂PD0325901、转化生长因子-β抑制剂A-83-01和Rho相关蛋白激酶抑制剂Y27632。此外,表观遗传调节剂如组蛋白脱乙酰酶抑制剂可通过组蛋白乙酰化来促进重编程因子与宿主细胞DNA结合,增加染色质可及性以提高重编程效率。

研究发现,丙戊酸和丁酸钠这2种组蛋白脱乙酰酶抑制剂均不能有效抑制犬组蛋白脱乙酰酶;帕比司他和维生素C的联合应用在体外可有效抑制组蛋白脱乙酰酶功能且没有显著的细胞毒性作用,虽然可增加犬胚胎成纤维细胞组蛋白乙酰化,但并没有促进犬体细胞的重编程过程。研究认为,维生素C与毛喉素的添加对于重编程犬真皮成纤维细胞是必要的。其中,毛喉素是一种腺苷酸环化酶激活剂,能够提高细胞内环磷腺苷酸的水平,影响DNA甲基转移酶和组蛋白脱乙酰酶等表观遗传酶的活性,最终促进诱导多能干细胞的生成。因此,仍需进一步筛选适用于激活犬诱导多能干细胞内源多能性网络的更多小分子化合物组合以获得犬诱导多能干细胞。
 
内源多能性网络激活后,需要合适的培养基长期维持诱导多能干细胞多能性并保持不分化。一般来说,胚胎干细胞的培养条件可获得大多数诱导多能干细胞。犬胚胎干细胞在以灭活小鼠胚胎成纤维细胞为饲养层细胞的条件下生长,并加入完全培养基,主要包括敲除DMEM或DMEM/F12、15%~20%胎牛血清或敲除血清替代物、β-巯基乙醇、
GlutaMax、非必需氨基酸、青霉素、链霉素、人或鼠白血病抑制因子、人碱性成纤维细胞生长因子等。
 
出自《犬诱导多能干细胞的研究进展与应用前景》 作者:高佳璇,高晨,李雨珏。