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三步酶消化法在羊精原干细胞分离中的优化应用2025-08-18 08:41:52

在羊SSCs分离中三步酶消化法效果相对较优,该方法是在二步酶消化法的基础上又加入胰蛋白酶和DNaseI对细胞进行消化处理。孔群芳等实验发现,用三步酶方法从山羊每克睾丸组织获取的平均细胞数高于前人用二步酶消化法对山羊、牛、水牛和绵羊处理后的细胞数。SSCs经分离后,悬液并不能完全彻底地分离目的细胞,因此需要根据各种细胞组分条件的不同对目的细胞进行富集,从而达到纯化的目的。常见的SSCs富集主要通过磁珠分离、密度梯度离心、流式仪细胞分选、免疫磁珠和差异贴壁法等方法进行富集。

SSCs的富集方法主要有连续密度梯度离心法、选择性贴附法、单位重力沉降法、离心淘洗法、流式细胞分选术及免疫磁珠分离技术等。差速贴壁法的原理是SSCs特异性地在细胞表面表达层粘连蛋白的受体β1和α6整合素,使得SSCs与层粘连蛋白有着最高的亲和力,而分化的精原细胞会优先于未分化的精原细胞附着在胶原蛋白上。目前,差速贴壁法是最为常用的富集方法,该方法先将细胞悬液依次接种在在明胶、大鼠鼠尾胶原并收集非贴壁细胞,最后将收集的非贴壁细胞加入到层粘连蛋白涂层的12孔培养皿中,最后收集贴壁细胞,在羊的SSCs纯化中,因其操作容易且成本较低,纯化后与其他方法相差较小而被普遍使用。
 
SSCs体外培养体系的发展是一个漫长的过程,其核心在于模拟体内曲细精管环境以促进SSCs的体外生长。羊SSCs体外培养体系的建立需高度模拟体内生精微环境,但传统方法因依赖血清和异源饲养层细胞,存在批次差异大、外源因子作用被掩盖等问题。近年来,针对羊SSCs的研究已在培养基成分、生长因子组合及无血清培养体系方面取得突破,相较于早期小鼠模型的研究范式已有一定区别。
 
出自《羊精原干细胞体外培养及诱导分化的研究进展》作者:何宣辉,康丹菊,郑隆清。