肠道干细胞的分离和培养是体外构建肠道类器官的基础，可以帮助理解肠道的发育、疾病机制以及药物筛选等。当前，基于单细胞分离的类器官构建方法主要依赖于基因修饰小鼠模型与流式分选技术的联用，因试验成本高，导致其在常规类器官培养体系中的应用范围受到显著限制。肠道干细胞位于隐窝基底部，使用胶原酶消化法或离子螯合法等方法去除肠道绒毛、分离肠道隐窝以构建肠道类器官模型的操作较为简便，且体外形成类器官的效率更高，广泛应用于类器官的构建。
 

在肠隐窝的分离技术中，胶原酶消化法和离子螯合法作为2种经典方法具有不同作用机制：前者通过胶原酶Ⅰ对细胞外基质中富含脯氨酸的胶原纤维进行特异性酶解，破坏上皮组织的空间构象稳定性，从而实现隐窝结构的离散化并获得有活性的干细胞；后者则基于二价阳离子的螯合作用，通过移除细胞膜表面蛋白与胞外基质间结合的钙离子和镁离子，导致细胞间连接蛋白构象改变，进而减弱细胞黏附力促进分离。

出自《肠道类器官体外培养及其应用进展》作者耿宁雨，杨奇奇，盛盈盈。