基因编辑技术在miRNA相关软骨研究中的应用进展2025-12-29 08:41:04
软骨-毛发发育不良是由非编码RNARMRP的点突变引起的。RMRP是一种含有268个核苷酸的非编码RNA，是线粒体RNA处理核糖核酸酶MRP的组成成分，该酶主要负责处理线粒体核糖体RNA。在软骨-毛发发育不良患者中发现了多种突变，研究表明RNaseMRP内切酶活性的丧失是该疾病发生的主要原因。近期研究发现，RMRP可产生2个较短的RNA分子，即RMRP-S1和RMRP-S2，它们能够发挥miRNA的作用。由于多个致病突变被定位到RMRP-S1和S2，这些miRNA的异常可能对软骨-毛发发育不良的表型多样性产生影响。通路分析进一步提示，许多受RMRP-S1/S2调控的基因与骨骼发育、毛囊发育和造血过程密切相关，从而揭示了RMRP-S1和S2的潜在生理功能。基因编辑技术在miRNA相关软骨发育研究中主要分为规律成簇间隔短回文重复序列相关核酸酶系统、锌指核酸酶和转录激活因子样效应核酸酶三大类，其原理、操作及特点存在显著差异。规律成簇间隔短回文重复序列相关核酸酶9系统通过单导向RNA引导Cas9蛋白靶向切割miRNA前体或宿主基因，在软骨发育研究中应用最广，例如通过双腺相关病毒载体递送金黄色葡萄球菌Cas9可高效敲除生长板软骨细胞中的miR-140簇，敲除效率较高且脱靶率低。
单细胞测序技术主要包括基于微流控和液滴分选的两大技术体系。基于微流控的平台如Fluidigm C1系统，通过物理隔离单细胞实现低通量但高灵敏度的miRNA-mRNA共测序，其原理依赖于微腔室芯片捕获单个细胞并完成反转录扩增，适用于miRNA与靶基因互作网络的单细胞分辨率解析。
出自《miRNA参与软骨发育的机制：新策略及新靶点》作者王正业，刘万林，赵振群
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