使用TRIzol试剂处理提取各组细胞总RNA。每1mlTRIzol加0.2ml氯仿，盖好管盖用力震荡15s，室温放置5min。使用高速冷冻型微量离心机4℃、12000g离心15min。取上层水相到新管中，分两次吸取400μl。每1mlTRIzol加0.6ml异丙醇，颠倒混匀。室温放置15min，4℃、12000g离心15min。倒去上清，将EP管口倒扣，让液体流尽，然后用1ml注射器吸干管壁水珠。每1mlTRIzol加1ml75％乙醇，颠倒混匀。7500g离心10min。去上清，吸干管壁液体，用RNase-free的水20μl溶解、混匀。使用机器测量样本浓度。使用SwEScriptAll-in-OneRTSuperMixforqPCR试剂盒逆转录样本，使用快速实时PCR系统检测目的mRNA的表达。使用2－ΔΔCT方法分析相对基因表达水平，并相对于GAPDH表达标准化。
 

将对照组和1.0μg/ml5-FU处理36h的肠道类器官分别用消化酶消化成单个细胞，200g离心4min，弃去培养液，收集细胞。将细胞用PBS洗涤后，200g离心4min去PBS，加500μl1×结合缓冲液，调整为5×105/ml的细胞悬浮液重悬细胞后，加入AnnexinV-FITC和碘化丙啶各2.5μl避光孵育15min后，使用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率。
 

出自《５-氟尿嘧啶致人源肠道类器官损伤的研究》作者方佳瑞，李晓彤，朱恒。