DE培养结束以后，在AdvancedDMEMF12培养基中补充FGF4（500ng/ml）和CHIR99021（3μmol/L）制备中肠/后肠分化培养基。将内胚层细胞在中肠/后肠分化培养基中诱导4d。每天添加新鲜培养基。MH阶段培养结束以后，收集漂浮球状体包埋于Matrigel基质胶中，并在含R-spondin-1（500ng/ml）、Noggin（100ng/ml）和EGF（100ng/ml）的HIOs培养基中培养，直至成熟。
 

获得培养成熟的人源肠道类器官后，将人源肠道类器官分为正常对照组和模型组。正常对照组用正常培养基培养。模型组使用5-FU进行干预，分别应用5-FU1.0、2.0和4.0μg/ml作用于类器官12、24和36h，并比较不同浓度和不同干预时间类器官的免疫荧光染色和qRT-PCR分析，选择合适的干预浓度和时间建立5-FU人源肠道类器官损伤模型。肠道类器官固定后，石蜡包埋切片。切片在环保型透明脱蜡液中脱蜡2次，每次20min。在梯度酒精（无水乙醇、95％乙醇、75％乙醇）中水化，每个梯度酒精10min。PBS清洗2次，每次5min。
 

出自《５-氟尿嘧啶致人源肠道类器官损伤的研究》作者方佳瑞，李晓彤，朱恒。