至此，类器官技术正式迈入3D培养时代，通过添加适用于不同胚层和器官的细胞因子，胃、肝、胰腺等类器官模型相继建立。在Hans Clevers工作的基础上，类器官技术开始向更复杂的器官系统拓展。Yoshiki Sasai团队于2011年首次在体外模拟眼睛视网膜的发育过程，证明多能干细胞拥有自发组装成极高复杂度的神经器官结构的惊人潜力。这项工作为后续构建大脑皮层、垂体等其他复杂神经类器官奠定方法论基础，并极大地启发整个领域对干细胞自组织能力上限的探索力。近年来血管化相关技术的创新，如微流控系统和内皮细胞包被模块的引入，进一步优化营养物质和氧气的运输条件，从而增强类器官模型的生理相关性。
 

经多年技术演进和条件优化，PDOs培养与药敏检测已成为一项流程相对成熟的标准化技术，其基本步骤如下：临床样本获取与处理。对于手术或活检获得患者肿瘤组织，经机械剪切和酶消化将组织解离为单细胞或小细胞团；对于来源于患者积液的样本，则通过细胞分选富集肿瘤细胞用于后续培养。三维基质包埋与培养启动。
 

将获得的细胞团块包埋于Matrigel，Hydrogel等三维基质中，加入成分明确的培养基启动类器官生长。培养基通常富含特定生长因子及信号通路调控分子，其具体配方可根据不同癌种特性进行优化，以实现对肿瘤细胞的选择性富集。扩增与传代培养。在长期培养过程中对类器官进行扩增和传代，往往需要调整培养基中生长因子或抑制剂体系，以维持其正常增殖能力和组织结构特征。药物敏感性测试。将解离后的类器官均匀接种至多孔板, 与梯度浓度的药物共培养数日后, 进行终点检测.
 

出自《患者来源肿瘤类器官临床药敏检测的回顾性分析》作者石铭, 高竟焜, 吴嘉兴。