UCB-NK-EXO的提取与鉴定方法2026-05-22 08:41:14
分别取UCB-NK-EXO与NK92-EXO稀释相同倍数，用注射器吸取后注入到纳米粒子追踪系统样品室内，并进行粒度分布及电位参数检测分析。按照体积比分别加入蛋白酶抑制剂、磷酸酶抑制剂和RIPA裂解液冰上裂解细胞或外泌体。离心，取上清即为提取的总蛋白，用BCA法测定蛋白含量，蛋白样品加入Loading buffer，变性。经SDS-PAGE电泳、转印至PVDF膜后，脱脂牛奶室温封闭，加入一抗，均按稀释，孵育过夜，洗涤后加入山羊抗兔IgG二抗室温孵育，洗膜后加入ECL化学发光显色液，用凝胶成像仪成像并利用Image J分析蛋白条带灰度值。以一定数量细胞接种孔板，每孔加入培养基。设置实验组和对照组，细胞贴壁后加入不同浓度的UCB-NK-EXO，每孔加入一定量，小时后加入CCK8溶液，孵育。孵育后，在波长处用酶标仪测定吸光度。根据公式计算细胞活性。为评估UCB-NK-EXO内化到肺癌细胞中的情况，用荧光染料标记UCB-NK-EXO与细胞共孵育，用激光共聚焦扫描显微镜观察，标记的细胞核附近的细胞质中和细胞膜上均出现荧光，说明UCB-NK-EXO能被A549细胞所摄取。
为评估UCB-NK-EXO在荷瘤小鼠的定位情况，用荧光染料标记的UCB-NK-EXO尾静脉注射小鼠，注射前和注射后分别用小动物活体成像仪观察UCB-NK-EXO在荷瘤小鼠体内分布，结果显示UCB-NK-EXO组肿瘤部位的荧光强度明显高于对照组。统计分析结果显示，相比于对照组，UCB-NK-EXO组在小鼠肿瘤的累积量显著增加，这一发现证实了UCB-NK-EXO在肿瘤部位的富集和定位。
出自《脐带血干细胞来源的NK细胞外泌体抗肺癌活性及初步机制探究》作者王晶晶 ，仝彩玲 ，颜涛玲。
上一篇： 从脐血干细胞诱导分化NK细胞
下一篇： UCB-NK-EXO抑制肺癌细胞增殖
