该方法囊泡产量高，但单次装载效率可能偏低，且剪切力可能影响囊泡的天然生物学特性。冻融循环利用冷冻过程中形成的冰晶破坏磷脂双层，通过多次循环促使膜破裂以实现内容物装载。该方法操作简便，对EVs物理完整性影响较小，但装载效率高度依赖于药物性质。例如，在递送抗肿瘤药物米特拉霉素时封装效率可达58％，而对于亲水性模型药物罗丹明6G，其效率则与共孵育无异。微流控法使EVs在微流控装置中受剪切应力导致膜破裂，随后重组为载药囊泡。例如，利用微流控制备的囊泡－脂质纳米颗粒杂合体，其融合效率超过45％，显著优于传统冻融法。
 

化学方法常使用皂苷作为膜透化剂，其通过与胆固醇相互作用在膜上形成孔隙，从而提高工程化EVs外源物质的包裹效率。例如，研究构建的一种基于人参皂苷Rh2工程化肿瘤细胞衍生微粒的机械优化药物递送平台，Rh2掺入微粒可调节膜脂组成并破坏脂筏完整性，显著降低颗粒硬度并增强可变形性，同时，Rh2抑制药物外流，协同增强药物功能。药物共孵育法是一种直接且简便的药物装载策略。该方法通过将待装载药物与预先制备的EVs共同孵育，借助疏水作用或浓度梯度使药物扩散进入EVs内部。例如，Wang等采用共孵育法将声敏剂二氢卟吩e6与免疫佐剂雷西莫特载入EVs，所构建的递送系统能够激活效应T细胞并逆转免疫失衡微环境。
 

出自《工程化细胞外囊泡在牙周炎治疗中的研究进展》作者蒋珊，钟雯婕，高翔。