消毒副产物暴露浓度设计与检测流程2026-07-17 08:45:15
本研究拟采用MSCs体外模型，结合分子对接模拟，探究环境浓度碘乙酸与三氯甲烷对MSCs多向分化的干扰效应，并解析其与代谢性疾病、神经退行性疾病、骨稳态失衡等有害结局的关联，以期为人群健康风险评估提供科学依据。骨髓间充质干细胞购自广州赛业生物科技有限公司，利用含有10％胎牛血清的Gibco培养基进行培养，待细胞汇合度达80％以上时进行传代。将细胞传代至6代后进行诱导分化及毒性测试。干细胞诱导成骨-成脂双向分化的步骤如下，将MSCs以每孔5000个细胞的密度接种到96孔板中，首先使用基础培养基进行培养，待细胞汇合度达到80％后替换为成骨成脂分化诱导培养基。分化诱导培养基由成骨培养基和成脂培养基等比例混合形成。每3～4d更换培养基，分化14d后，使用4％多聚甲醛固定15min，使用油红O对成脂分化后的脂肪滴进行染色20min，加入150µL异丙醇萃取染色的油红O染液，避光20min。吸取100µL萃取液加入96孔板中，使用酶标仪检测584nm处的吸光度，以检测脂肪滴的形成。使用茜素红对成骨分化形成的钙结节进行染色20min，使用10％氯化十六烷基吡啶萃取染色细胞20min，吸取100µL萃取液加入96孔板中，在酶标仪520nm处检测钙结节含量。干细胞诱导成神经分化的步骤如下，待细胞汇合度达80％左右时进行成神经诱导分化。
预诱导培养基由10ng∙mL−1bFGF、500μmol∙L−1β-ME、体积分数为10％FBS及低糖DMEM培养基配制而成，诱导培养基由100μg∙L−1BHA、体积分数为1％DMSO及不含血清的低糖DMEM培养基配制而成。预诱导和诱导时长均为24h。诱导分化48h后，使用荧光显微镜对已分化的细胞突触进行拍照，使用ImageJ软件测量细胞突触长度。用含0.1％DMSO的培养基将碘乙酸和三氯甲烷制成系列浓度梯度，在干细胞分化过程中进行暴露，含有0.1％DMSO的培养基作为阴性对照。
出自《碘乙酸和三氯甲烷对间充质干细胞多向分化的干扰作用及健康风险识别》作者郭俊岩，程佩双，郎玥明。
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