小肠类器官温和回收及残胶控制要点2026-11-06 08:46:03
通常宜选择处于扩增期、大小较均一且未明显过度囊泡化或坏死的类器官;过大、囊泡化明显或长期培养的类器官在回收和吹打过程中更易破裂,后续消化后也更容易出现细胞存活率下降、贴附率低和单层形成不均等问题。因此,在回收前可记录类器官培养天数、传代次数、每孔类器官数量、平均直径及形态特征,并将其作为后续模型重复性分析的重要来源。对于用于单层模型构建的类器官,部分商品化流程建议使用培养7~8 d、传代次数不超过15代且每孔数量相对充足的类器官,并提示供体差异、培养质量和生长天数均会影响后续接种效率。去胶不充分是该步骤最常见的失败原因之一。残留基质胶可表现为离心后细胞沉淀上方出现白色或半透明絮状物,也可在显微镜下形成胶块包裹类器官或细胞团。残胶过多会降低消化酶与类器官上皮的接触效率,使后续消化不均,造成大块细胞团残留、细胞计数偏低或接种后局部堆积;同时,基质胶残留还可能影响后续蛋白质组、转运体表达或药物吸附相关检测的解释。已有研究比较了细胞回收液、分散酶和含EDTA的磷酸盐缓冲液等不同基质胶去除方法,发现不同方法在基质胶去除效率和残留污染方面存在差异,其中分散酶在蛋白质组样本制备中显示出较高的肽段产量和较低的基质胶污染,提示基质胶去除方式本身可能影响下游分析结果。
因此,在药物吸收评价模型构建中,去胶步骤不宜仅作为前处理操作,而应作为影响模型均一性和数据可靠性的关键质量控制点。为减少回收过程中的细胞损失和机械损伤,操作中可采用低吸附枪头和离心管,必要时预先用培养基润洗枪头或适当剪宽枪头末端,以降低类器官黏附于塑料表面或因反复通过狭窄枪头而破裂的风险。若离心后仍可见明显残胶,可加入冰冷缓冲液或回收液再次短时间孵育并重复洗涤;若出现类器官大量破碎、沉淀松散或细胞碎片明显增多,则提示吹打过强、孵育时间过长或类器官初始状态不佳,应在后续实验中调整类器官收获时间、降低机械剪切强度或优化去胶试剂。
出自《小肠类器官来源屏障模型在药物吸收评价中的应用进展》作者张克霞,翟珊,张洲。
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