功能层面，则应重点评价与药物吸收相关的ABCB1/P-糖蛋白、ABCG2/BCRP、溶质载体转运体、CYP3A4、羧酸酯酶2、葡萄糖苷酸等表达或活性，并结合TEER、Lucifer yellow或荧光素异硫氰酸酯-葡聚糖通透性检测判断屏障完整性。Klein等进一步研究表明，小肠类器官的增殖状态和分化状态会影响药物毒性评价结果，不同分化状态下小分子化合物的毒性反应可产生差异，提示在药物评价中必须明确模型所处的分化阶段，并避免将不同成熟度模型的结果直接比较。
 

因此，增殖与分化的时序调控应以模型应用目的为导向：若用于药物吸收和代谢/转运研究，应优先获得稳定屏障、成熟吸收细胞表型及可检测的转运体和代谢酶功能；若用于再生、损伤修复或干细胞行为研究，则可保留更高比例的增殖细胞。实际建模中，应同步记录分化起始时间、分化持续时间、培养基关键因子、TEER变化、细胞活率、紧密连接连续性和吸收相关功能指标，以提高不同实验批次和不同研究之间的可比性。屏障形成的监测与验证是判断3D类器官是否成功转化为功能性2D屏障模型的关键环节。由于类器官来源单层膜的屏障强度受供体来源、肠段类型、接种密度、包被基质、培养基组成和分化状态等因素影响，故应结合TEER动态变化、旁路通透性、紧密连接结构、上皮极性以及药物吸收相关功能进行综合评价。
 

出自《小肠类器官来源屏障模型在药物吸收评价中的应用进展》作者张克霞，翟珊，张洲。