PCV2疫苗免疫后的细胞免疫水平的提高2022-02-15 08:55:30
PCV2 Cap蛋白169-180肽段是一段诱骗表位,在PCV2 Cap蛋白氨基酸序列中非常保守。于成等将PCV2 Cap蛋白诱骗表位(169-180aa)肽段用 Cap蛋白的中和表位进行替换,改造后的Cap做成疫苗免疫小鼠,结果与未改造Cap蛋白免疫组相比,改造后的Cap蛋白疫苗组可显著提高免疫效力且未检测到诱骗抗体的出现,显示了良好的应用前景。本研究将PCV2 Cap蛋白诱骗表位(169-180aa)肽段用一个 Pan DR T 辅助细胞表位(氨基酸序列:AKFVAAWTLKAAA)进行替换,获得一个改构马赛克Cap蛋白,以期避免Cap蛋白诱骗表位对机体免疫资源的消耗,并进一步提高 PCV2 疫苗免疫后的细胞免疫水平,增强疫苗的免疫效力。PCV2的病毒拯救已有多篇文献报道。本研究利用猪的密码子偏好性对改构马赛克Cap蛋白进行密码子重排,然后以 PCV2 HeB-1基因组为骨架,将其 Cap 蛋白基因用改构马赛克Cap蛋白的基因序列进行替换,获得的基因组序列进行全基因合成、真核表达载体构建、PK-15细胞转染及多轮筛选,最终获得 1 株拯救的马赛克PCV2 SD株。间接免疫荧光检测、PCR 扩增以及基因测序结果表明马赛克PCV2 SD株可与 PCV2抗体发生反应,病毒Cap蛋白基因序列与前期设计序列一致,未见碱基突变与缺失。电镜下马赛克PCV2 SD株约17-20nm,具有完整的PCV2病毒粒子特征,PK-15细胞传代培养10代后毒价可达105.5 TCID50/mL以上,显示了良好的培养特征。
将马赛克PCV2 SD株制备成疫苗免疫小鼠,ELISA检测发现马赛克PCV2 SD株组小鼠血清中基本检测不到诱骗抗体,而PCV2 HeB-1株组则可检测到较高水平的诱骗抗体,差异显著(P<0.05),表明拯救的马赛克PCV2 SD株中的诱骗表位被成功替换、与前期设想一致。马赛克PCV2 SD株组与 PCV2 HeB-1株组相比,免疫后小鼠血清的中和抗体水平提高1.6倍以上。马赛克PCV2 SD株组中和抗体提高可能与添加Pan DR T辅助细胞表位,更强的激活了小鼠机体的免疫系统有关系。总之,本研究成功获得了马赛克PCV2 SD株,与未改造的病毒相比,该新型毒株制备的疫苗能增强动物机体的细胞免疫和体液免疫应答,具有较高的研究价值和市场应用前景。
出自《猪圆环病毒2型新型疫苗的研制及中和抗体快速检测方法的建立》作者侯竹美。
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