提高PK-15细胞中PCV2病毒生产效率的方法2022-02-15 09:17:21
PCV2是猪圆环病毒相关性疾病（PCVAD）的病原体，可引起断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）、猪呼吸疾病综合征（PRDC）等，并且作为免疫抑制性疾病，常与猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒等并发，对世界各国的养猪业造成巨大经济损失。疫苗免疫是预防PCV2病毒感染相关疾病的最有效方式，目前已有多种商业化疫苗进入临床，其中包括多种PCV2全病毒灭活制备的疫苗。PK-15细胞来源于猪肾，可用于PCV2病毒的分离与培养，是当前国内批准的制备PCV2全病毒灭活疫苗唯一可用的生产细胞。然而PCV2病毒在PK-15细胞上的培养毒价偏低，一般在105.0TCID50/mL左右，而常规PCV2全病毒灭活疫苗的半成品毒价需在105.5TCID50/mL以上，造成疫苗生产成本居高不下。因此如何提高PCV2病毒在PK-15细胞上的增殖效率，是PCV2全病毒灭活疫苗生产中急需解决的难题。
在已有的研究中，人们尝试了多种提高PK-15细胞中PCV2病毒生产效率的方法，如PK-15细胞亚克隆法、D-氨基葡萄糖等化学试剂添加法、细胞因子添加法等，并取得一定的效果。猪IFN-γ可影响PCV2病毒在PK-15细胞上的感染和复制，与未处理组相比，细胞培养液中添加 PoIFN-γ可提高PCV2病毒的产量50倍以上。既然细胞培养液中额外添加PoIFN-γ可提高PCV2病毒产量，那么PK-15细胞自身过量表达 PoIFN-γ是否也可达到这个效果呢？本研究通过基因工程手段将PoIFN-γ基因稳定转染到PK-15细胞，制备一株PoIFN-γ过表达细胞系，进一步完成该细胞系的传代稳定性试验、PCV2病毒扩增效率试验等，为PCV2病毒的高效体外增殖提供新的思路和借鉴。
出自《猪圆环病毒2型新型疫苗的研制及中和抗体快速检测方法的建立》作者侯竹美
