培养液加入PoIFN-γ抗体显著降低PCV2的增殖效率2022-02-15 09:21:07
PCV2病毒侵染PK-15细胞后，病毒粒子首先解聚，然后病毒基因组进入细胞核并在里面滚环复制。由于在细胞核分裂的S期PCV2病毒需要宿主的细胞酶辅助才能完成病毒的复制过程，而病毒基因组又难于穿过核膜，造成PCV2在细胞中的增殖效率不高，毒价偏低。D-氨基葡萄糖通过促进 PCV2 病毒基因组DNA进入细胞核的方式提高PCV2 病毒度过S期的效率，进而提高病毒滴度，而赭曲霉毒素A可以通过氧化应激介导的p38/ERK1/2/ MAPK 信号通路促进PCV2病毒增殖。但以上两种方法所用的试剂较为昂贵，其本身就会大量增加疫苗生产成本。因此如何提高 PCV2 在PK-15细胞中增殖效果，对改进PCV2的分离效率、降低PCV2全病毒灭活疫苗的生产成本等具有重要意义。Meerts等研究发现在PK-15细胞培养基中分别添加IFN-ɑ与IFN-γ均可促进PCV2病毒的感染，提高病毒的产量; 其中，PK-15细胞培养基中添加 500U/mL的IFN-γ预处理，比不添加IFN-γ组相比，PCV2病毒的扩增效率可提高 10 倍以上。IFN-γ并不会增加细胞膜上PCV2受体的表达。PCV2基因组含有干扰素刺激反应元件，添加干扰素激活后可诱导PCV2病毒基因表达。此外，干扰素-γ可以调节细胞增殖途径中的蛋白质，进而增强PCV2在PK-15细胞中的复制。因此，PK-15细胞在体外培养中添加 IFN-γ可提高PCV2的病毒滴度具有一定的理论根据。本研究将含 PoIFN-γ的真核表达质粒转染PK-15细胞，获得一株PK15-PoIFN-γ细胞系，定量PCR、酶联免疫吸附反应（ELISA）和间接免疫荧光（IFA）检测发现PoIFN-γ基因能在PK15-PoIFN-γ细胞中稳定表达，且细胞活力没有受外源 PoIFN-γ 基因插入的影响。
PK15-PoIFN-γ细胞系显著增强了PCV2病毒的增殖效率，病毒毒价增加到1×108.4TCID50/mL以上。连传15代PK15-PoIFN-γ细胞对 PCV2 病毒的增殖无影响，培养液中加入PoIFN-γ抗体可显著降低PCV2的增殖效率，表明PoIFN-γ在PK-15细胞的稳定表达是提高PCV2增殖效率的主要因素。
出自《猪圆环病毒2型新型疫苗的研制及中和抗体快速检测方法的建立》作者侯竹美
