人脐带间充质干细胞在不同培养条件下的增殖迁移分化2022-08-15 08:53:14
取生长状态良好第3代人脐带间充质干细胞，以每孔2×105个细胞接种于6孔板中，细胞同步化后，对照组更换为含体积分数为10％胎牛血清的L-DMEM完全培养基培养，实验组更换为含多发性骨髓瘤细胞条件培养液的L-DMEM完全培养基培养，孵育24h后收集细胞，采用 Trizol 法提取总RNA，采用Real-time PCR进行基因片段扩增并定量。 反应条件： ① Real-time PCR：95 ℃ 5 s，59 ℃ 20 s，72 ℃ 20 s，40 个循环；②熔解曲线：95 ℃ 5 s，65 ℃ 5 s，60个循环。引物序列如下，GAPDH 上游5’-ATC CTG GGC TAC ACT GAG CA；下游 5’-CAA AGT GGT CGT TGA GG GCA -3’；p16 上游 5’-ATC GCG ATG TCG CAC GGT A -3’；下游5’-ATG TCT GAG GGA CCT TCC GC-3’；p21 上游：5’-CCG TGA GCG ATG GAA CTT CG-3’；下游 5’-TGC CTC CTC CCA ACT CAT CC -3’。各管所加模板RNA的量约为 1 μL，最终通过 Real-time PCR 仪记录的Ct值相对定量。人脐带间充质干细胞在不同培养条件下的增殖、迁移、分化情况以及p21、p16的mRNA表达。采用SPSS 22.0统计学软件进行数据处理，用Graph Pad Prism 8软件进行统计作图，流式结果用Flowjo V10分析，采用t检验进行组间比较，P＜ 0.05为差异有显著性意义。统计学方法已经通过贵州中医药大学生物统计学专家审核。
出自《多发性骨髓瘤细胞条件培养液对人脐带间充质干细胞增殖和分化的影响》作者杨姁,王飞清,赵嘉宁。
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