PRP-Exos是一种特定直径的细胞外囊2022-09-13 08:42:29
虽然膝骨关节炎的病理表现相似,但并非所有患者对药物等干预的反应是一致的,说明膝骨关节炎可能存在不同亚型。YUAN 等 通过转录组测序将骨关节炎分为C1- 糖胺聚糖代谢紊乱骨关节炎亚型、C2-胶原代谢紊乱骨关节炎亚型、C3- 激活的感觉神经元骨关节炎亚型及 C4- 炎症骨关节炎亚型。C1的特征是软骨聚蛋白聚糖表达增加、多功能蛋白聚糖表达下降,反映膝骨关节炎早期;C2的特征是软骨下骨血管丛丰富、5A1与6A1胶原高表达;C3的特征是感觉神经纤维与软骨接触,高表达神经分子,体现出疼痛敏感;C4的特征是T淋巴细胞及单核细胞被激活,促进炎症反应。这项研究也反映出膝骨关节炎的不同分型或许与最初或最主要的发病机制相关。PRP-Exos是一种特定直径的细胞外囊泡,密度为1.1-1.2g/mL,可完成细胞间的具有生物活性的脂质、核酸 (DNA、mRNAs 及非编码 RNAs) 及蛋白质的运输,促进受体细胞的基因表达以及细胞增殖、凋亡的调节与免疫调节等。外泌体来源于内体,细胞质膜内陷可以形成早期内体,内体向腔内出芽形成腔内囊泡,成熟多囊泡内体与细胞膜融合释放腔内囊泡到细胞外。
PRP-Exos的提取可分为2步:首先需完成富血小板血浆的制备,多数研究选择2次离心。将血液加入带抗凝剂的采血管中,首次离心将血小板从血浆中的红细胞和白细胞中分离,然后将分离的含有血小板的血浆转移到新的离心管中,并以较高离心力再次离心,弃去大部分上清血浆,然后将血小板沉淀重新悬浮在残留血浆中以获得富血小板血浆。IYER 等采用一步法离心,150r/min离心5min 制备大鼠富血小板血浆,而 ZHANG等在4℃下采用1000×g离心20min制备兔源富血小板血浆。第二步需完成外泌体的提取,采用的方法包括超高速离心法及试剂盒法。CERVENAKOVA等采用ExoQuickTM 等试剂盒可较为便捷地完成外泌体的提取,4℃过夜孵育后1500×g离心30 min。超高速离心法步骤较为复杂,如非新鲜富血小板血浆需重新离心悬浮,血小板颗粒被激活,然后通过低速离心以丢弃细胞碎片,取得的上清液通过 0.22μm过滤器完成大直径囊泡的去除,其次以10000-20000×g连续离心30-60min,将外泌体与微囊泡分离。以100000-1300000×g的离心力完成70-90min的2次超高速离心以获取PRP-Exos,以少量PBS重悬后可保存于-80℃。也有部分研究直接从血浆或者血小板裂解物中收集外泌体。
出自《富血小板血浆来源外泌体治疗膝骨关节炎的机制与作用》作者黄双霜,向小娜,余曦。
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