模式动物果蝇flySAM基因转录激活模式2023-02-06 08:47:02
与传统方法比，flySAM有显著的优势：（1）载体仅需克隆20bpDNA，成本低，操作简单；（2）实现原位基因的转录激活，与传统Gal4/UAS强制过表达相比，能够减少副作用；（3）可以同时克隆多个sgRNA，便于激活多个基因；（4）许多基因如泛素化连接酶经过转录后剪切修饰，形成多个不同的成熟转录本，进而翻译出多个蛋白异构体，不同异构体可能发挥不同功能。使用传统过表达方式只能过表达其中一种异构体，为研究基因功能造成了一定障碍。使用flySAM系统在基因组水平上激活基因表达，可同时提高目的基因所有转录本的转录水平，在研究基因功能时有得天独厚的优势。此系统的效率高度依赖于sgRNA中20bp靶向序列的选择，为了提高flySAM的效率，对sgRNA参数进行探究后发现：（1）通常sgRNA GC碱基含量愈高，激活愈显著；（2）存在位置效应，激活有效区主要集中在转录起始位点上游150bp左右，当sgRNA远离起始位点上游600bp时，尽管GC含量高，也失去激活能力；（3）sgRNA靶向DNA非模板链时，与靶向模板链相比激活效果更加显著。完备的工作效率测试和工作条件探索极大地提升了flySAM系统应用的高效性和便利性，完整的sgRNA设计标准对所有希望使用该系统的科研工作者开放，帮助他们实现高效的基因转录激活。构建转录激活果蝇时首先根据已知优化条件设计高效sgRNA，并构建质粒，质粒的注射及转基因激活果蝇的筛选与转基因干扰果蝇构建流程相似，得到转录激活品系后，测序确认，编号（TH代表清华，A代表激活）并存储资源库。基于该系统清华大学构建了丰富的转基因品系资源库，与基因突变和基因干扰技术互相补充，为疾病模型构建、药物功能筛选等科研工作提供了极大助力。
出自《模式动物果蝇的基因调控前沿技术》作者韩玉婷，许博文，李羽童.
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