当前位置:首页 > 新闻中心 > 行业资讯 > >

RNAscope是新型的RNA原位杂交技术2023-04-25 09:01:43

qRT-PCR是灵敏度高、可重复性、可以定量的传统方法,能通过移植细胞在整个宿主器官内的细胞特异性DNA序列对移植细胞进行准确和灵敏的检测,将抽样误差降至最低。由于基因组的重复性和物种的特异性,Alu序列仍然是评估异种模型中移植细胞生物分布的首选标记。人类Alu序列可以通过qRT-PCR从基因组DNA中扩增和定量,具有高度的准确性。

对于有特定基因序列的细胞,如嵌合抗原受体T细胞,可以根据特异性的基因序列设计引物序列。Schubert等在急性肾损伤小鼠静脉输注后第 3、6天,通过生物发光技术显示 MSCs 被清除。然而,当在第6天对几个组织进行从qRT-PCR检测时,在血液、肝脏、肾脏和肺中检测到不同数量mRNA。因此,qRT-PCR似乎是更灵敏的方法,可能是检测组织中晚期MSCs存在的更好选择,并可用于补充成像技术。
 
组织学方法包括传统的免疫组织化学、免疫荧光以及原位杂交等。免疫组织化学和免疫荧光是传统的检测方法。原位杂交方法是基于DNA 或DNA/RNA双链互补的大分子识别技术,与荧光团偶联的核苷酸整合的DNA链可以用作探针以杂交到追踪细胞的互补序列上,然后通过荧光显微镜或成像系统进行观测。该技术能够高灵敏度和特异性识别目标DNA或RNA序列,并且实现在单细胞水平杂交信号的可视化。但是在应用较短的cDNA探针时,荧光原位杂交技术不能保证 100%杂交。RNAscope是新型的RNA原位杂交技术,该法克服了以前的RNA原位杂交技术的弱点,如灵敏度低、非特异性杂交、对样本要求高等,可替代传统的FISH原位检测的方法,灵敏度更高。荣斌等使用RNAscope检测到CAR-T在输注14 d后少量特异性分布于骨髓和脾脏。组织学和qRT-PCR 技术均是在离体组织上进行的,相比于成像技术,它们不能直接获得细胞在体内的分布情况。
 
出自《细胞治疗产品示踪技术研究进展》作者郝晓芳,耿兴超,黄瑛.