LCM是唯一能够获取目标细胞空间位置的技术2024-03-06 09:07:16
单细胞分选是单细胞测序的首要步骤，其关键在于分离和收集大批量高质量完整的目标细胞群，尽可能保留细胞的各种特征。Gross等详细介绍了5种单细胞分选方法，即限制稀释法、显微操作法、荧光激活细胞分选术、激光捕获显微切割和微流体技术。这些单细胞分选方法各有利弊，可根据实验需要选择合适的分选方法。FACS具有高通量和分选能力强的主要优点，但可能对某些细胞有损害。LCM是唯一能够获取目标细胞空间位置的技术，但操作难度高。显微操纵器辅助细胞拾取是一个手动过程，因此速度很慢，但可以最大程度地控制单个细胞。限制稀释依赖于统计分布，易于实施并且可以自动化。然而，单细胞的存在通常需要随后进行验证。除了这些成熟的技术外，新型微流体细胞分选仪亦具有众多优点，如需要的样本量小、分选压力比较低、细胞应激现象发生的概率也较低。组织或细胞群体中的每个单细胞因累积的新生突变而具有自己独特的基因组，如单核苷酸变异、结构变异、拷贝数变异和非整倍体等。突变的频率反映了细胞群体基因组完整性的丧失，这是癌症和衰老问题的关键所在。为了检测单细胞特有的突变，需要单细胞全基因组测序，所以全基因组扩增是必不可少的。全基因组扩增包括：简并寡核苷酸引物聚合酶链式反应 、多次位移扩增、多次退火和基于环的循环扩增、乳化全基因组扩增、通过转座子插入的线性扩增技术以及互补链多重末端标记扩增技术等。其中，MDA不适合固定后的单细胞样本扩增，但适用于新鲜样本的单细胞基因组扩增。MALBAC运用线性扩增，显著减少了实验偏倚，既可用于新鲜样本的单细胞基因组扩增，也可用于固定后样本的单细胞基因组扩增。
出自《单细胞测序技术在口腔鳞状细胞癌研究中的应用》作者曹澄，王剑，胡建道.
