类器官具有器官特有的多种细胞类型2024-06-18 09:21:18
类器官技术建立在干细胞技术、经典发育生物学和细胞混合培养的基础上。目标器官的类型不同、干细胞的来源不同，类器官的培养方式也会有所不同。但类器官构建的核心是相同的，即重现目标器官的内在发育过程，使其具备一定的功能。使用位于小鼠皮脂腺基底部的Blimp1+干细胞来培养皮脂腺类器官已经取得了成功。类器官的培养过程如下：首先借助流式细胞术分选出小鼠背部皮肤中Blimp1+细胞。然后将分选出的细胞接种在3D基质胶培养物中。类器官的培养需要根据实际情况调整细胞培养环境，加入关键的生长因子、无机矿物质或蛋白质等。常见的Matrigel是小鼠EHS肿瘤中提取的可溶的、无菌的基底膜蛋白，已经成功应用于多种上皮干细胞的类器官培养。人成纤维细胞生长因子2、鼠表皮细胞生长因子、重组人R-spondin-1和鼠Noggin被用来改良类器官培养基。在类器官的培养中，定期更换 Matrigel和培养基，可获得小鼠的皮脂腺类器官。类器官的自我组装方式及空间组织结构类似于体内器官，具有器官特有的多种细胞类型。利用光学显微镜观察类器官的大小、直径、细胞排列和空间结构，可测量类器官的形成效能。结合组织化学染色或特殊染色方法检测分子标志物的表达和胞质内容物，能够明确构成类器官的细胞类型。此外，还可通过核苷酸类似物的示踪实验，观测细胞的增殖活动。
研究者培养的单个Blimp+干细胞能够增殖分化形成含有内外两层的圆球体结构，这一结构与体内的皮脂腺形态高度相似。利用免疫荧光检测皮脂腺和类器官的标志物表达情况，结果显示，皮脂腺的外周细胞和类器官的外层细胞均表达增殖标志物Ki67、微小染色体维持复合体2和角蛋白K5、K15，而皮脂腺的成熟区、坏死区细胞和类器官的内层细胞标志物表达均为阴性。
出自《皮脂腺类器官的构建要素与应用》作者:武禄，刘标，翁立新.
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