冻融循环有效降低同种异体组织的免疫原性2024-08-08 09:04:08
经过处理后,周围神经的施万细胞基底膜和层粘连蛋白的分布保持不变,而且保存3周后依然能检测到一些活细胞。Kaizawa等则将大鼠坐骨神经放入液氮中冷冻,直到达到热平衡,然后将其置于室温的磷酸盐缓冲盐水中2min。此冷冻和解冻循环重复3次。随后的体内实验结果表明 dECM移植组与自体神经移植组移植部位观察到的CD8+细胞数量无显著差异,而与同种异体神经移植组有显著差异,说明冻融循环可以有效降低同种异体组织的免疫原性。
其他物理脱细胞方法还包括高渗/低渗液体渗透压破裂法、非热不可逆电穿孔法、封闭式超声法等,但这些物理脱细胞方法在神经组织上的应用效果还有待进一步研究。除物理方法外,化学法及酶法常联合在一起用于达成脱细胞的目的。其原理为使用洗涤剂破坏细胞膜结构,联合生物酶等进一步降解细胞成分,从而完成脱细胞制备。目前常用的洗涤剂包括:① 离子型洗涤剂:十二烷基硫酸钠、脱氧胆酸钠、tritonX-200等;② 非离子型洗涤剂:triton X-100;③两性洗涤剂:磺胺甜菜碱-10、磺胺甜菜碱-16、CHAPS;④ 酸和碱:盐酸、氢氧化钠等。常用的生物酶包括:① 核酸酶:DNA酶、RNA酶;② 蛋白酶:胰蛋白酶、胃蛋白酶。
Sondell等最先开始尝试使用化学试剂制备大鼠坐骨神经的dECM,他们清除外部碎屑后,将分离的坐骨神经浸入蒸馏水中,在室温下保存7h,期间多次更换蒸馏水。然后将神经放入在含3%triton X-100的蒸馏水中过夜,随后将神经取出,放入含4%SDC的蒸馏水中搅拌24h。然后重复1次以上提取程序,用水清洗后即可使用。体外评估(包括形态学、免疫组化、电子显微镜等)显示脱细胞效果良好,其体内实验结果显示轴突能以1.2mm/d的速度在dECM中生长。
出自《脱细胞基质水凝胶治疗周围神经损伤的研究进展》作者:刘业祖,刘如恩.
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