差速贴壁法是精原干细胞纯化中简单常用的方法2024-09-02 09:04:32
机械分离法对牛、羊和猪等家畜的生殖细胞较为适用，具有操作简便及成本较低的优点，但容易在操作过程中造成细胞损伤，且杂细胞较多，影响后续细胞培养。Yang等研究发现，机械法与酶消化法结合使用能够使猪SSCs的成活率提高10倍。也有研究认为，酶消化法处理获得的精原干细胞具有较高的活力水平和较少的杂细胞。目前，常用的酶包括胰酶、Dispase分解酶、透明质酸酶、DNase酶以及胶原酶Ⅳ等。两步酶消化法首先对睾丸组织进行消化处理，再进一步消化分离出的曲细精管，最终获得睾丸单细胞悬液。温飞等采用两步酶消化法分离了山羊SSCs，并发现分子标记物CD90和PLZF在免疫荧光鉴定中大量表达。相较于两步酶消化法，三步酶消化法增加了一步使用胶原酶的处理。宋连杰采用三步酶消化法成功分离了蒙古马的SSCs，并对其进行了培养，发现酶消化状况对后期SSCs的体外培养有极大影响，因此，必须严格控制酶的消化时间和细胞状态。在完成精原干细胞的初步分离之后，需根据细胞特性选择适宜的纯化方法。目前，富集精原干细胞常采用差速贴壁法、密度梯度离心法、流式细胞分选法和免疫磁珠分选法等。差速贴壁法的原理是不同细胞具有不同的贴壁时间。密度梯度离心法是根据不同细胞在介质中分层不同，导致细胞带的位置不同。流式细胞分选法是利用荧光素标记细胞表面分子，通过多参数的筛选，将目的细胞与荧光抗体相结合。免疫磁珠分选法是利用磁珠包被抗体，特异性识别目的细胞表面的抗原。
差速贴壁法是精原干细胞纯化中最简单且常用的方法，其优点是简单经济且不需要仪器，但是，差速贴壁法纯化效率较低，得到的细胞中可能会含有支持细胞、间质细胞及管周肌样细胞等较高比例的其他细胞。张茂等用明胶对猪精原干细胞进行差速贴壁，纯化得到了一定比例的SSCs。
出自《精原干细胞体外分离培养》作者:张淼荗，安雪姣，卢曾奎.
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