不同方法的联合应用可以改善方法间的不足2024-09-02 09:09:07
密度梯度离心法弥补了差速贴壁法的不足，能够获得较高纯度的SSCs，但离心后会降低细胞活力且细胞带不明显。Izadyar等采用差速贴壁法分离出了纯度大于50％的牛精原细胞，再结合Percoll密度梯度离心法与差速贴壁法将其纯化，发现纯化后的精原干细胞纯度大于67％，且比单独使用差速贴壁法可以获得纯度更高的精原干细胞，这表明可以通过组合使用不同纯化方法来提高SSCs的纯度。Tiptanavattana等也使用差速贴壁法和不连续的密度梯度离心法联合得到了高度富集的家猫SSCs。流式细胞分选法和免疫磁珠分选法能够获得高纯度的SSCs，测量速度快且不影响细胞活力，但需要特殊设备且费用较高。SSCs的分子标记物是使用流式细胞分选法和免疫磁珠分选法富集SSCs的基础，但家畜SSCs表面分子标记物的研究较少，且目前针对各物种精原干细胞的特异性分子标记也尚未明确，因此这两种方法的应用受到一定程度的限制。比如分子标记物CD90已在许多物种中通过FACS分选并被确定是SSCs最常用的表面标记之一，然而Sun等认为，CD90在猪SSCs的分选中并不是一个合适的标记。综上，不同方法各有优劣，不同方法的联合应用可以改善方法间的不足，并有效提高精原干细胞的纯度。
2003年，Kanatsu等首次成功实现了小鼠SSCs的长期体外培养。2008年，KanatsuShinohara等对上述方法进行了进一步改进，在层粘连蛋白中添加血清及生长因子，构建出了完整的小鼠SSCs体外培养体系。随着小鼠和大鼠等啮齿动物SSCs体外培养体系的建立为开展家畜SSCs体外培养的研究奠定了基础。
出自《精原干细胞体外分离培养》作者:张淼荗，安雪姣，卢曾奎.
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