该方法操作简单，不依赖任何特殊设备，但是内容物分子装载效率较低，且只适用于可轻松通过细胞膜的目标分子。外源性内容物装载方法较多，包括细胞外囊泡共培养、电穿孔、超声、冻融循环、挤压和表面活性剂辅助渗透等。不同于亲本细胞共培养，细胞外囊泡共培养是指在特定温度下将内容物分子与纯化的细胞外囊泡一起孵育，内容物可通过共培养封装到细胞外囊泡中。亲水的内容物分子很难依靠单纯细胞外囊泡共培养装载到细胞外囊泡中，为了克服细胞外囊泡共培养的局限性，研究者们开发了利用物理刺激或者化学药物改善细胞外囊泡膜通透性的替代方法。
 

电穿孔是使用电脉冲在细胞外囊泡膜上形成孔隙，内容物分子可以通过这些孔隙渗透到细胞外囊泡中，该方法的装载效率可以通过程序控制，但是内容物分子有形成聚集体的风险。超声、冻融循环和挤压这些物理手段都可以通过类似的机制将内容物分子封装到细胞外囊泡中。不同的是，超声处理会导致核酸降解，不适合核酸的封装；冻融循环会影响蛋白质的活性；挤压处理的内容物装载效率高，可以产生大小均匀的细胞外囊泡，但是有研究称挤压后的细胞外囊泡膜电位会发生改变，并具有细胞毒性。表面活性剂如皂苷可在细胞外囊泡膜上产生孔隙，实现内容物分子的封装，但是皂苷在体内有溶血活性，负载药物后需要进行彻底净化。
 

近年来，利用工程化细胞外囊泡治疗骨缺损相关疾病的研究数量增长迅速，这得益于疾病机制相关研究的完善以及药理学和材料科学的快速发展。骨形态发生蛋白2是一种强效骨诱导因子，其引入为增强细胞外囊泡成骨作用提供了一种现成的策略。间充质干细胞衍生的细胞外囊泡具有骨诱导特性，但是幼稚间充质干细胞衍生细胞外囊泡在促进骨再生方面效果甚微。
 

出自《工程化细胞外囊泡修复骨缺损的再生作用》作者:周洋，刘可鑫，王得利.