骨髓间充质干细胞向黑素细胞分化的实验方法2025-06-23 08:53:54
在小鼠中的研究发现,利用骨髓间充质干细胞可以诱导分化出功能性黑素细胞。该方法需首先从小鼠骨髓中分离并扩大培养BMMSCs,分离过程只需在骨髓单细胞悬液中加入DMEM培养基,初步筛选贴壁的细胞为BMMSCs,24h后,更换完全培养基(DMEM添加20%血清)进行MSCs的扩大培养,待细胞传代到合适的数量时,开始诱导分化黑素细胞。在诱导分化阶段,需在培养基中添加1.5μg/mL氢化可的松、10μg/mL胰岛素、10μg/mL转铁蛋白、4ng/mL基础成纤维细胞基本因子及10%胎牛血清,用以促进黑素细胞分化,诱导120~180d,分化细胞的形态学与黑素细胞相似,并可观察到成熟的黑素体的相关标志物表达,大多数诱导的黑素细胞处于G1期或S期,靶细胞的产率为大约80%。这种小鼠骨髓间充质干细胞来源的黑素细胞能产生活性酪氨酸酶和黑色素,与角质形成细胞共培养,可将黑素颗粒传递至角质形成细胞中,如果在诱导分化体系中加入α-MSH,则可促进黑素细胞中酪氨酸酶活性升高,黑素合成增加。在组织工程皮肤中移植这种黑素细胞,仍然可存活,且可表达黑素细胞相关蛋白标志物。因此,从BMMSCs分化成熟黑素细胞是体外获得黑素细胞的一条潜在途径。
脂肪间充质干细胞诱导分化黑素细胞。通过在体外模拟诱导微环境,对生长稳定的人黑素细胞进行窄谱中波紫外线照射,刺激细胞将生长因子分泌在培养液中,收集上清液作为母液,再添加诱导因子进行诱导。诱导方法:从人腹部获取皮下脂肪,在无菌条件下将脂肪制成单细胞悬液并培养在低糖DMEM培养基中,添加10%胎牛血清。
出自《干细胞诱导分化的黑素细胞治疗白癜风的研究进展》 作者:耿颖颖,黄鹏飞,王云馨.
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