NB-UVB与Wnt信号通路协同诱导黑素细胞分化2025-06-23 08:56:06
待细胞汇合度达到80%后,使用分化培养基诱导分化。给予稳定生长的人表皮黑素细胞低剂量NB-UVB照射24h,后收集上清液,与添加了Wnt-3a蛋白的培养基混合,作为诱导培养基使用。培养至第6周,给予NB-UVB照射,培养至第10周,即分化为黑素细胞。在这个诱导分化体系中包含着不同的影响因素,必需与非必需因素需要进一步去论证。牙髓间充质干细胞能够自发分化为完全成熟的黑素细胞。从健康人体中提取人牙髓,轻轻分离出牙髓组织,在无菌条件下制成单细胞悬液,培养于MegaCellTM基础培养基中,添加10%FBS,100μML-抗坏血酸-2-磷酸,2mML-谷氨酰胺,100U/mL青霉素-链霉素。传代两次后,更换为黑素细胞分化培养基,即DMEM添加10%FBS,1.5μg/mL氢化可的松,10μg/mL胰岛素,10μg/mL转铁蛋白,4ng/mL碱性成纤维细胞生长因子。此分化过程需要经历120d,可获得表达黑素细胞标志蛋白的功能性黑素细胞。
诱导性多能干细胞也是体外分化黑素细胞的重要途径。由于iPSC的供体细胞来自患者自身组织,具备患者的特定遗传背景,因此,iPSC分化而来的黑素细胞更适合用于患者自身移植。iPSC分化为黑素细胞分为两个阶段,第一阶段将供体来源的成体细胞去分化为多能干细胞,然后再利用诱导剂,诱导多能干细胞分化为黑素细胞。目前研究所使用的供体细胞有T细胞和真皮成纤维细胞。体外培养的T细胞,使用仙台病毒载体,转入重编程因子(OCT3/4,SOX2,KLF4,c-MYC),并养于X射线照射过的饲养层细胞上,2d后更换培养基为含有4ng/mL的成纤维细胞生长因子的人iPS培养基(DMEM/Ham‘sF12培养基,添加20%血清替代物、2mM谷氨酰胺、1×10-4M非必需氨基酸和1×10-4M的2-巯基乙醇)。
出自《干细胞诱导分化的黑素细胞治疗白癜风的研究进展》 作者:耿颖颖,黄鹏飞,王云馨.
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