问：什么是细胞转染？2025-03-24 09:09:27
答：将解冻的HEK293T细胞传代培养至细胞培养皿中，待长至80％左右的汇合度时准备转染。在转染前将细胞培养液换至无血清培养液，饥饿处理30min。同时将8μgSIRT6表达质粒与实验室此前构建的PAX2、VSVG包装质粒按4:3:2的比例加入到250μL的Opti-MEM培养液中，再将20μL聚乙烯亚胺试剂加入到另一个250μL的Opti-MEM培养液中，静置5min。之后将2个Opti-MEM培养液混合，室温静置20min。在HEK293T细胞饥饿处理结束后，加入完全培养基，再加入静置后的Opti-MEM混合培养液，轻轻晃匀，置于培养箱中培养12h后更换为正常培养液，48h后观察慢病毒包装效率，收集病毒液至离心管中。接着将毒液置于2000r/min离心机中离心5min，取上清至新的离心管中，重复2次，以免细胞残留。在病毒液中加入0.2％聚凝胺，混合并过滤后备用。将解冻的MSCs传代培养至30％左右的汇合度，将毒液与培养基按照1:1的比例加入细胞中，置于培养箱中培养12h后更换完全培养基。细胞长至80％汇合度时，用2μg/mL嘌呤霉素筛选，并置于荧光显微镜下观察，持续筛选3d，获得稳定表达SIRT6的MSCs。
出自《SIRT6基因促进间充质干细胞对犬的抗衰老作用》作者:韩东瑶，李巴仑，韩苗，
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