问：什么是Western blot检测？2025-05-12 09:24:43
答：进行分组处理后，去除培养液，PBS洗涤2次，加入200μLRIPA蛋白裂解缓冲液，用细胞刮板将细胞刮下并收集在Ep管中振荡1min，冰上静置5min，重复3次，在4℃条件下12000×g离心15min，取上清液弃沉淀，以1∶3的比例加入4×Buffer缓冲液 （Buffer∶上清液=1∶3），在沸水中煮10min，冷却至室温后，-20℃保存。蛋白样品通过SDS-PAGE电泳分离并转移至PVDF膜上，室温条件下5％脱脂奶粉封闭2h，将TBST稀释的200μL抗体 （1∶500，Ⅰ型胶原蛋白、基质金属蛋白酶9、Bax、P21抗体，内参为β-actin） 滴加在膜上，4 ℃孵育过夜，次日回收一抗，用TBST洗涤4次，每次5min，在室温条件下与二抗 （1∶4000） 孵育2h，用TBST洗涤4次，每次5min，最后将条带置于化学发光成像仪上，滴加超敏ECL曝光液，检测蛋白表达含量。使用Image J软件进行灰度值分析。出自《α-酮戊二酸工程化小细胞外囊泡延缓皮肤衰老》作者:吴芷菁,李加利,张佳昕.
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