而且基因编辑涉及的细胞种类、脑区仍有待进一步论证。由于基因编辑目前并不可逆，wtHTT的功能尚未完全阐明，因此要求尽可能保留 wtHTT 的功能，这对等位基因特异性编辑提出更高的要求。CRISPR/Cas9基因编辑系统切割双链DNA的过程依赖PAM位点的存在。SNP的存在使得等位基因间存在不同的 PAM 位点，Shin等设计了成对gRNA，借助仅存在于突变基因上的SNP形成的PAM位点，在人源纤维母细胞实现中对 HTT突变基因的精准删除。对于这类等位基因特异性策略的开发，依靠大量的HD患者遗传信息，且人种之间存在差异，然而目前缺乏关于我国突变HTT基因SNP 的相关数据，这将制约了这一策略在国内人群的应用。
 

CRISPR/Cas9基因编辑技术的脱靶效应也备受学术界关注。研究发现在编辑系统导入后6h内即完成对靶基因的编辑，此后Cas9蛋白以及gRNA 的持续表达是导致脱靶效应的重要原因。因此，Merienne等通过导入包含靶向HTT基因的gRNA（sgHTT）以及靶向Cas9基因的gRNA（sgCas9）的新型CRISPR/Cas9基因编辑系统，使该系统在切除HTT基因的同时，通过sgCas9将导入机体的Cas9基因切除，实现自我灭活。该技术在抑制mHTT表达的同时，能够大幅降低脱靶效应。此外，脱靶效应更低的Cas9蛋白以及防止双链 DNA断裂的切口酶等相关研发工作也正在进行。一旦基因被成功编辑，疗效将持续维持，因此并不要求基因编辑相关外源基因的长期表达。利用脂质体等非病毒载体实现基因编辑是未来的发展方向。目前已能实现利用静脉注射的脂质体将外源 mRNA 导入猕猴神经元，指导合成功能蛋白。未来进一步可实现在脂质体递送的相关mRNA指导下，目的细胞短期合成基因编辑所需元件。
 

出自《亨廷顿病基因治疗的进展与挑战》作者裴中.吴腾腾.