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DNAzyme用于中性分子检测2021-12-28 09:13:55

三磷酸腺苷(ATP)是生物体内组织细胞一切生命活动所需能量的直接来源, 能够储存和传递化学能量, 是细胞内能量的“分子货币”. 其参与包括肌肉收缩、细胞功能、重要的细胞化合物的合成和降解、膜运输等一系列的生物学过程, 是细胞活性和细胞损伤的一个重要指标. 因此, 实现对ATP的定量检测在生化研究、临床诊断、食品安全控制和环境分析领域都具有重要的意义。近年来, 科学家通过ATP依赖性DNA连接酶(能够通过3个核苷酸转移步骤封闭多核苷酸中由5-P04和3-0H末端组成的裂口, 转移步骤涉及连接酶-腺苷酸与DNA-腺苷酸中间体), 构建了对ATP的检测平台. 但是这些检测方法主要存在灵敏度低的缺点.
 
为了解决这个问题, 科学家利用DNAzymes独特的自剪切活性, 能够催化反应能够历经多圈循环,从而引发多个基底的剪切反应这一特性, 将DNAzymes引入ATP检测平台,用以信号循环放大, 提高检测的灵敏度.Lu等人[将辅因子ATP依赖性的酶连接反应和自剪切核酸酶DNAzyme信号放大用于构建ATP检测体系.由于T4DNA连接酶对辅因子ATP具有高度的特异性, 当检测系统中不存在目标分子ATP时, 2段独立的DNA片段不能被连接成一条完整的DNAzyme序列, 后续的自剪切催化反应就不能发生. 因此, 此检测体系对ATP的响应具有高度的选择性, 同时, 连接反应产生的DNAzyme能够循环放大自剪切所产生的电化学信号变化, 增强传感系统的灵敏度, 使得其对于ATP的检测限达到0.053 nmol/L(S/N=3)。
 
出自《脱氧核酶在生物检测及基因治疗中的研究进展》作者范思思, 程进, 冀斌,。