核酶与脱氧核酶的应用2021-12-30 08:48:13
核酶是1类单链小分子ＲNA，分子量小、分子结构简单、具有酶的催化活性，能催化特定序列的切割、断裂反应。Trepanier等构建了对靶序列亲和力较高、裂解活性较强的抗-HCV 脱氧核酶，作用24h可使转染细胞中HCVＲNA靶序列含量降低32％—48％。锁核酸核酶是在脱氧核酶的2条结合臂上引入≥1个锁核酸单体构建而成的新型核酸酶，与其他核酸酶相比，具有更强的分子杂交能力、更高的酶切活性和切割效率。锁核酸的引入极大增加了LNAzyme与底物ＲNA的杂交亲和力，增强了切割反应的酶促活力，使LNAzyme较相应的DNAzyme切割效率明显提高。针对HCV5‘UTＲ的IＲES设计合成的锁核酸核酶对HCV基因表达显示出较强的抑制作用。规律性短重复回文序列簇 -Cas9核酸酶系统CＲISPＲ/Cas9是近年发展起来的1种基因定点修饰技术，该集合系统是很多细菌和大多数古生菌的天然免疫系统，通过对入侵的病毒和核酸特异性的识别，由ＲNA指导Cas9蛋白对靶向基因DNA做修饰。近期，Price等从1 种革兰氏阴性菌中分离得到了核酸酶Cas9，FnCas9在特异性引导ＲNA的引导下，能直接靶向HCVＲNA。FnCas9通过抑制HCVＲNA翻译，使 HCV 基因表达沉默。将FnCas9/rgＲNA 转染到Huh7.5细胞后，感染HCV，导致HCV蛋白表达相对于对照组降低50％—60％。Marceau等在Huh7.5.1细胞中敲除3个HCV入胞必需基因，明显降低了HCVＲNA和颗粒形成。这些研究通过CＲISPＲ/Cas9 技术为靶向病毒或宿主“治愈”HCV 提供了有力的证据，未来有待进一步深入的研究。
出自《基因治疗在丙型肝炎病毒感染治疗中的研究进展》作者廖鑫忠 段晓琼 陈利民。
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