工艺相关杂质是指来源于生产过程而非细胞本身固有成分的一类物质。干细胞药物的制备工艺复杂，涉及供者材料采集、细胞分离、扩增、分化、基因修饰、纯化、制剂化等多个环节，每个环节都可能引入工艺相关杂质，对产品质量和患者安全构成风险。高风险的工艺相关杂质包括具有生物活性的蛋白、核酸等物质，以及不具有生物活性的物理化学材料。在采用基因修饰、基因编辑技术制备的干细胞药物中，用于基因修饰的蛋白质分子、核酸物质可能作为工艺相关杂质残留在终产品中。蛋白质分子典型代表包括Cas9核酸酶和腺相关病毒衣壳蛋白。
 

研究表明，这些蛋白残留具有潜在的免疫原性风险——在体外PBMC模型中，Cas9蛋白浓度达到143nmol·L-1时可诱导显著的细胞因子释放；AAV6衣壳蛋白在7.2×1011capsids·mL-1浓度下即可激活适应性免疫应答。核酸物质包括质粒DNA、guideRNA、mRNA等。研究表明，质粒DNA在细胞培养条件下可稳定存在50d以上，且具有随机整合进入宿主基因组的潜力。即使在没有CRISPR组分存在的情况下，自发性质粒整合虽罕见但确有可能发生，一旦整合将随细胞扩增而持续存在。
 

出自《干细胞药物的研发和质量控制进展》作者张可华，孟淑芳。