间质干细胞分离培养及保存2022-02-08 09:14:28
关于MSCs的分离、鉴定和扩增，以前有不同的研究报告，但所有的 MSCs都符合国际细胞治疗协会ISCT提出的最低标准。MSCs的分离主要是基于其粘附于塑料表面的能力，但这种方法导致了异质细胞（干细胞及其祖细胞）的形成。骨髓间质干细胞被认为是最佳的间质干细胞来源，并作为比较其他来源间质干细胞的标准。建立一套完整的MSCs分离、鉴定和扩增的程序是成功地将这些细胞作为再生医学的良好来源的关键。与骨髓不同，许多来自其他组织的MSCs 可以通过非侵入性方法轻松获得，并且其增殖可以维持许多代。用Ficoll密度梯度法分离骨髓、外周血和滑液中的 MSCs，并将其转移接种培养瓶中。从骨髓中分离MSCs时，一些造血细胞也会粘附在塑料培养皿上，但是在传代培养过程中，这些杂细胞会被洗掉，仅留下粘附的成纤维样细胞。用胶原酶消化后，从各种组织来源（脂肪，牙齿，子宫内膜，胎盘，沃顿氏胶冻）中分离出 MSCs，然后以不同的密度进行细胞培养。最近，研究人员探索了一种使用新型骨髓滤器分离 BM-MSCs的有效方法，该方法耗时少并且避免了外部污染的风险。可使用条件培养基（如 DMEM、DMEM-F12、α-MEM、DMEM-LG、DMED-HG 和 RPMI）培养从不同来源分离的MSCs。完全培养基是在条件培养基中添加10％胎牛血清、胎牛血清或新生小牛血清。除了培养基和添加补充剂外，氧浓度也能够影响 MSCs的扩增和增殖。MSCs也能够在添加了生长因子的低葡萄糖DMEM中培养，例如添加成纤维细胞生长因子（FGF），表皮生长因子（EGF）和B27到完全培养基中，能使MSCs大量扩增。但通常添加 10％FBS的DMEM被广泛应用于MSCs的体外培养和扩增，然而，外源性 FBS 的使用在干细胞培养中备受争议。
从以往的研究来看，MSCs在临床上的应用将会显著增多。对于临床应用来说，需要大量现成的MSCs。为此，需要建立一套合适的体外MSCs扩增程序及后期的冷冻保存细胞库业务。这将能提供更好的机会来推动这些细胞在研究和临床应用中的潜在用途和广泛应用。考虑到其在未来临床和治疗应用中的用途，需要在冷冻和保存的同时确保这些细胞的安全性和有效性。为了选择最佳的冷冻保存介质，以及冷冻和复苏过程中温度的均匀变化、冷冻装置和液氮的长期贮存是必须要考虑的因素。
出自《间质干细胞亚群及其胞外囊泡对卵巢癌和乳腺癌影响的研究 》作者李涛。
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