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细胞在冷冻保存介质长期保持其干细胞的能力2022-02-08 09:16:59

第一个重要因素是选择最佳的冷冻保存介质,在这种介质中,细胞可以长期保持其干细胞的能力。在冷冻保存介质中,细胞需要动物基础添加剂(如 FBS)作为其重要的营养来源,但之前的研究表明动物蛋白很难从MSCs中去除,并且这些驻留的外源蛋白可能会增加接受这些细胞治疗患者的不良反应。因此,使用无血清培养基对于MSCs的冷冻保存非常重要,研究人员已经成功地将无血清培养基用于MSCs的冷冻保存。最近,也有研究人员使用人白蛋白和神经肽代替FBS,MSCs在这种培养条件下也能够保持其细胞活性和增殖潜能。另外,冷冻保存介质中需要添加冷冻保护剂,以防止在冻存过程对细胞的任何冷冻损伤。

其中二甲基亚砜是用于MSCs冷冻保存中最常见的CPAs。然而,DMSO对人类和动物均具有一定的毒性等不良影响,这使得在临床应用中使用MSCs冻存变得较为复杂。输注在DMSO中冻存的MSCs后,患者会出现不同程度的并发症,例如恶心,呕吐,头痛,高血压,腹泻和低血压,有时也会出现严重后果,例如心血管和呼吸系统问题。由于这些毒性作用,这就有必要去除(用等渗溶液洗涤)或用其它无毒副作用的CPA去代替 DMSO。目前引入了一种新方法在组织冷冻保存中,即将 0.05M 葡萄糖、0.05M蔗糖和1.5 M乙二醇混合在磷酸盐缓冲液中,在组织冷冻保存 3个月后仍能成功复苏MSCs。该方法在任何阶段都没有使用 DMSO和动物血清,但其尚未广泛应用于 MSCs 的冷冻保存。从这些研究发现可以清楚地看出,对于临床级应用细胞来说,有必要采用低浓度DMSO的冻存保存方案,或者用无毒的替代品替代DMSO。对于MSCs的冷冻保存,第二个重要因素是冷冻降温速率。以1℃/min的速度缓慢冷冻通常是MSCs保存的最佳速度。
 
为此,电流控制速率冷冻器适用于冻存保存过程中的温度控制以及温度保持。也可以对这些CRFs进行个性化编程,以找出样品在冷冻过程中所经历的确切适宜温度。尽管CRFs有这些优点,但在大量MSCs储存期间,这些CRFs无法对所有样品管的温度均匀性控制,因此对于大规模储存时必须开发出先进的CRFs。最近,Praxair公司开发出了一款更先进的CRFs,可以为每个样品提供单独的制冷剂。对于大规模的MSCs 储存,除了安全有效的冷冻保存外,日常的监管指南也很重要。
 
出自《间质干细胞亚群及其胞外囊泡对卵巢癌和乳腺癌影响的研究 》作者李涛。