相比之下，密度梯度离心法是第二种应用最广泛的技术，与超离心法相比，其分离获得的EVs纯度更高，EVs蛋白和RNA的含量也更高。尽管蔗糖是最常用的缓冲材料，但最近研究发现碘克沙醇能够更好地保持囊泡的大小。然而，由于其操作复杂、成本和耗时等问题，这可能不适用于临床应用。超滤是根据大小最常用分离EVs的方法，可以说是一种更为简单的分离方法，也是一种超速离心的可行替代方法，尤其是与体积排阻色谱法结合使用时。除了以上这些分离方法外，也经常使用聚乙二醇等其它物质来沉淀分离EVs。这种方法具有可扩展的优势，如果与超速离心结合时，可获得足够纯度的EVs。因此，这是一种能大规模生产EVs用于临床的可行方法，并已在临床研究中得到应用。
 

如果与体积排阻色谱法或超滤结合也可以看到这种分离方法的可扩展性，且能以高效的方式分离EVs。这有可能会被ISEV作为分离EVs标准化方法。根据ISEV的指南，EVs的特性可以通过以下四种不同的方法进行描述。首先，应确定EVs的细胞来源（如MSC-EVs的情况下为MSCs）；其次，还应量化从特定数量的细胞衍生的EVs的数量。这可以通过直接测量EVs数量的方式来实现，如纳米颗粒跟踪分析和流式细胞术，并通过量化蛋白质、脂质或RNA的总水平来间接放映EVs的数量。根据ISEV2018的指南，应通过分析EVs中至少一个与质膜相关的跨膜蛋白（如 CD9、CD63、CD81）和一个胞质蛋白（如TSG101和ALIX）来证实其存在。再者，应通过使用Western-blot实验分析EVs的蛋白质组分并通过使用PCR 进行核酸分析来表征EVs所属的亚型。
 

出自《间质干细胞亚群及其胞外囊泡对卵巢癌和乳腺癌影响的研究 》作者李涛。