结果发现：血清中PCV2中和抗体水平与血清中的病毒拷贝数呈负相关，如果中和抗体水平提高，则血液中PCV2的病毒拷贝数会明显下降，其中1个例子就是PMWS发病猪的PCV2血清中和抗体水平明显比无PMWS但PCV2抗原阳性猪的低。由此可见，在清除血液循环中PCV2病毒过程中血清中的 PCV2 中和抗体发挥着重要的作用。
 

细胞中和试验法是PCV2血清中和抗体检测的主要方法，临床应用中存在3个缺点：1、技术要求高，需要有专门技术人员；2、检测周期长，需要 2-3d 的时间才能出结果；3、检测样本少，不适合大量样本检测。本研究以实验室制备的PCV2中和单抗6F8为阻断抗体，制备了一种 PCV2 血清中和抗体阻断ELISA试剂盒。首先将单抗6F8进行HRP标记，并优化HRP标记单抗6F8的工作浓度，避免了常规ELISA试剂盒需要酶标二抗的问题，检测时间缩短40min以上。抗原在酶标板上的包被温度和时间都要严格控制，包被时间过长或过短以及包被温度过高或过低都会影响抗原与酶标板的有效结合。抗原包被ELISA板的适合温度一般会选择4℃或者37℃。本研究的研究结果表明，包被温度选择4℃效果要优于37℃，可能原因是改构马赛克Cap蛋白在37℃时包被速度过快，影响了酶标板与蛋白反应的均一性；从时间上来看，包被16h是最佳时间。所以本研究中优选方法是改构马赛克Cap蛋白进行4℃包被16h。ELISA反应的显色液有邻苯二胺（OPD）、3‟，3‟，5‟，5‟-四甲基联苯胺（TMB）等等，根据不同的目的需求选择不同的显色液。OPD的缺点是稳定性差，需要现用现配，且需要避光保存。

 

出自《猪圆环病毒2型新型疫苗的研制及中和抗体快速检测方法的建立》作者侯竹美