TCR细胞疗法结合抗原鉴定2021-09-02 09:33:54
肿瘤及病毒感染的患者中培养获得的CTL往往可获得丰度较高的TCR序列，鉴定针对这些TCR序列的抗原显得尤为重要。在较早的TCR研究中，使用黑色素瘤患者肿瘤分离出的CTL与抗原阴性细胞及表达基因组DNA或者cDNA文库的细胞共培养，然后筛选出IFN．^y阳性细胞克隆进行后续分析，获得了经典的黑色素瘤抗原：MAGE—A1，MAGE—A2，MAGE．A3和MART-1¨1。抗原肽展示库是目前抗原鉴定的常见方法，库种类根据呈递基质有杆状病毒库和酵母展示库。早期使用杆状病毒呈递抗原库，pMHC通过杆状病毒gp64锚定到s侈细胞膜上，然后使用可溶的TCR（soluble TCR，sTCR）染色筛选s丹细胞，通过3～4轮筛选后，测序阳性可被TCR识别的肽段，从而获得TCR识别的抗原。杆状病毒库的库容一般为0．3～1 X 105，相对于9或者15个氨基酸的肽段，只能涵盖很小一部分。酵母展示库在库容上可以有较大的提升，酵母展示库已经被广泛用于抗体、TCR、pMHC展示。酵母呈递的pMHC同样使用荧光标记的可溶性TCR经过多轮筛选阳性pMHC复合物，经过测序通常会得到几十到数百肽段序列，再通过位置权重矩阵计算出天然纯在的抗原肽。酵母库的优势在于其较大库容，从而不需要对抗原进行预测，但主要缺点是pMI-IC结果不稳定，容易发生错误折叠，从而需要对pMHC结构进行修饰。此外sTCR的表达是一个限速步骤，且sTCR的特异性和亲和力都有可能发生改变。
哺乳动物细胞呈递的pMHC库通过胞内信号的改变筛选出相互识别的TCR及pMHC。Joglekar等引将pMHC复合物与T细胞的激活信号相结合，在pMHC胞内区共表达CD28．CD3，使用NFAT．GFP Jurkat细胞，当pMHC与特异性T细胞结合后，激活Jurkat细胞中CD3信号，诱导转录因子NFAT介导的GFP分子的表达从而可作为筛选标记，而进快速筛选已知TCR的识别抗原肽。“等¨41使用胞啃现象创建了利用胞啃信号识别相互识别的细胞。利用表达已知TCR的Jurkat细胞和表达多种pMHC的K562细胞相互孵育，若TCR识别pMHC后，Jurkat上的TCR则会转移到K562上，然后分选m表达TCR的K562细胞测序，获得可能被TCR识别的抗原序列。
Kula等创建的T—SCAN平台，使用颗粒酶素B报告系统，接受特异性T细胞释放的颗粒霉素B后，报告细胞中被颗粒霉素B识别的荧光信号产生，从而可以分选出TCR特异性识别的抗原肽呈递细胞，进而获得抗原肽序列。抗原肽的鉴定在TCR—T的开发中具有十分重要作用，是对TCR的交叉识别能力，评价TCR—T安全性的重要手段，也是目前TCR—T开发中的重点和难点。
出自《TCR,T细胞疗法的开发与产业化》作者芮魏，刘光娜，童丹
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