目前，虽未在临床试验中观察到由于错配引发的严重不良事件，但在小鼠模型中已发生致死性结果。为减少错配发生的概率，目前有多种外源 TCR的改构策略，这些策略主要涉及 TCR α 和 β 链的修饰改造。一种方式是用小鼠恒定区替换人 TCR α 和β 链的 C-末端区域。由于鼠源 TCR 链之间的配对倾向性，这种鼠源化 TCR 不仅与人 T 细胞内源性 TCR链之间的错配明显减少，在人 T 细胞表面表达水平增高，且鼠源化 TCR 与人 CD3 形成的复合物比人 TCR更为稳定。虽这种转化在降低错配方面表现出了明显优势，但由于外源（鼠源）蛋白序列的引入可能使宿主对转导的自身 T 细胞产生免疫排斥反应。
 

另一种方式是通过在外源 TCR 的 α 和 β 链恒定区引入半胱氨酸，使表达的外源 TCR 在胞内区形成额外的二硫键，以增加链间的亲和力，减少内外源 TCR链间的错配［13-14］，这种修饰使 TCR 链配对的正确率高达 95％。另外，可能由于与 CD3 复合物的组装优势，半胱氨酸的修饰还显著增加了外源 TCR 的表达水平。相对鼠源化 TCR，这种单个氨基酸的修饰引发免疫原性的可能性相对较小。还有一种类似的修饰方法，在 TCR β 链 C 区引入精氨酸，在 TCR α链 C 区引入甘氨酸，在 α、β 链间形成“knob-in-hole”结构，通过空间位阻增加目标 α 和 β 链的配对倾向。同时，还有一种非 CD3 依赖性的嵌合抗原受体修饰方法，类似 CAR 结构，直接将 CD3ζ 与 TCR α 和TCR β 的可变区融合。这种融合受体不会与内源性TCR 链配对，因此也避免了形成自体反应 TCR 二聚体的风险。

 

由于 T 细胞内 CD3 分子的数量有限，错配的 TCR 二聚体占用 CD3 分子会进一步减少正确配对的 TCR 复合物可用的 CD3 分子数量，降低转导 TCR T 细胞的功能活性。这种修饰在解决错配问题的同时也解除了胞内 CD3 分子的数量对TCR表达数量的限制，但不排除这种融合突变引发宿主免疫排斥，或由于扰乱了胞内信号通路降低细胞功能活性的可能。TCR 的表达水平与 T 细胞被靶抗原激活的敏感性相关。除修饰 TCR 提高其配对正确率外，还可通过多种间接调节的方式增加 TCR T 细胞的活性，如选用 EF，1α、SFFV 等强启动子进行密码子优化，载体增加中央聚嘌呤序列和土拨鼠感染病毒转录后调节元件等元件。
 

在增加表达的同时，协调转导的 TCR α和β 链的表达也有助于提高其配对正确性及 TCR的表达量。一般认为，将 α 和 β 链基因放在同一个表达载体上，既可协调链间的表达量，还可降低多个载体插入引起突变的概率。同一载体基因间采用内部核糖体切入位点元件或病毒 2A 肽有助于提高 α 和 β 链基因的表达协调性，但这些结构仍存在下游基因表达较少，或 2A肽可能引起免疫原性等不足。另外，去除 α 和β 链的 N 糖基化位点提高 TCR 活性、沉默内源性 TCR的表达避免错配、干扰胞内抑制信号通路等方法也正在进一步探索中。TCR 的表达量是决定 T 干细胞治疗效果的重要因素，但外源 TCR 与内源 TCR 链间的错配所带来的不确定性和安全性风险仍应引起高度关注。目前多种TCR改构策略均各有利弊，具体选择仍需进一步权衡。TCR 链表达载体的设计、元件的选择、序列的优化等多种方案可作为提高受体表达量的重要辅助手段。
 

出自《TCR T 细胞疗法的研究挑战和审评考虑》作者徐隆昌，韦薇.