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MSC⁃exo分离及储存的应用2022-05-12 09:05:14

研究发现细胞分泌的外泌体具有极强的异质性,不同的微环境及不同的干预条件均会影响外泌体中包含的内容物。Liu等研究发现相比常规的培养条件,低氧条件下(1%O2)培养的MSC可分泌更多的外泌体,且其内含的功能性物质的量也有一定的变化。Ban等通过比较不同pH的培养基对外泌体分离的影响发现,酸性条件是外泌体生存的有利坏境,其分离出的外泌体蛋白及核酸浓度与其他pH环境相比显著增加。目前对于最佳的MSC培养条件仍需探索,使之可分泌出疗效更好的外泌体以确保临床疗效。

研究者一般选择状态好且增殖能力强的第3~5代MSC的条件培养上清来分离外泌体。目前对于外泌体的富集和纯化方法主要有:超速离心法、聚合沉淀法、超滤法及抗体亲和捕获法等。超速离心法是收集外泌体最常见及最常规的方法,大多数研究者用此方法收集,在此基础上通过密度梯度的分离,可以获得高纯度的胞外囊泡。但是,这种方法虽然纯度高,但费时费力,还可能破坏外泌体结构,导致囊泡内成分丢失。聚合沉淀法也是较为常用的方法,商品化试剂盒(ExQuick试剂盒)即基于这种原理,其操作方便,耗时短,且无需使用昂贵的设备,但可能存在化学品污染,影响后续试验。超滤法利用超滤膜通过压力或离心设备收集外泌体,其滤膜易堵塞,导致提取外泌体的纯度较低。抗体亲和捕获法成本高,产量低,不适合临床大规模的使用。对于提取出的外泌体还需要通过电镜、免疫印迹以及流式细胞术等技术进一步的鉴定。
 
目前,外泌体的提取及纯化特别是如何大规模的提取出适用于临床的外泌体仍然具有一定挑战,还需要继续摸索有利于外泌体生存及分离的条件,提高外泌体的提取效率以更好地适用于临床。分离出的外泌体在4℃的条件下可以储存长达1周而不会发生严重降解,但如果需要长时间保存需要低温冻存。重悬于无菌PBS溶液中的外泌体可以在-20℃保存6个月,在-80℃保存1年,且其形态及生物学特性不发生改变。
 
出自《间充质干细胞外泌体的生物学功能及其治疗支气管肺发育不良研究进展》作者高倩茜,程锐。